Діагностичні проблеми каріотипування плода. Маркерні хромосоми. Мозаїцизм хромосом.

Лімфоцити крові плоду. Для хромосомного аналізу крові плоду використовують стандартну методику стимулювання лімфоцитів фитогемагглютинином. Зазвичай аналізують 11-20 метафазних пластинок.

Цей метод дає найбільш адекватне уявлення про хромосомному статус плода і настійно рекомендується для карі-отіпірованія плода в разі хромосомного мозаицизма в плаценті, а також при наявності вад розвитку не тільки в II триместрі, але, як показує наш досвід, і в пізні терміни вагітності. В останньому випадку кариотипирование плода дозволяє вирішити питання про тактику ведення вагітності, пологів та неонатального періоду.

Діагностичні проблеми каріотипування плода

До діагностичних помилок при цитогенетичної ПД можуть привести структурні перебудови хромосом, що виникли de novo, сверхчісленние маркерні хромосоми і мозаицизм хромосом.

Структурні перебудови хромосом, що виникли de novo

Структурні перебудови хромосом, НЕ успадковані від будь-кого з батьків при підтвердженому батьківство, зустрічаються досить рідко (0,06-0,20% від всіх пренатальних досліджень). При виявленні перебудови хромосом, дійсно виникла de novo, неможливо повністю виключити мікроперестройкі і, отже, незбалансованість хромосомного набору у плода. У цій ситуації ризик народження дитини з аномаліями розвитку становить 10%.

маркерні хромосоми

Сверхчісленние маркерні хромосоми в пренатальному періоді виявляються з частотою 0,6-0,96 / 1000. Всі маркерні хромосоми діляться на кілька класів: виникли de novo і сімейні, мозаїчні і немозаічние, спутнічной і позбавлені супутників. Ризик народження дитини з аномаліями розвитку залежить від хромосом, які беруть участь в їх утворенні, а також від їх приналежності до того чи іншого класу. Тому виявлення в каріотипі плода маркерной хромосоми вимагає не тільки її ідентифікації усіма доступними методами, але і кариотипирования батьків для встановлення походження маркера і форми анеуплоїдії (повна або мозаїчна).

Прогноз щодо плода більш сприятливий, якщо один з фенотипически нормальних батьків є носієм ідентичної маркерні хромосоми.

Загальний ризик аномалій розвитку у плода при сверхчісленних маркерних хромосомах, що виникли de novo, становить близько 8% для сателітних маркерів (що містять короткі плечі акроцентріческіх хромосом, що несуть рибосомні гени) і 27% -для несателлітних. При цьому наявність еухроматінових матеріалу, виявленого методами диференціального фарбування (G-, Q-, NOR-, DA / DAPI) або FISH з використанням наборів цельнохромосомних ДНК-зондів, свідчить про часткову трисомії і істотно збільшує ймовірність аномалій розвитку.

мозаїцизм хромосом

Проблемі хромосомного мозаицизма в ПД приділяється особлива увага в зв`язку з тим, що накопичені на сьогодні дані свідчать про сумісність з внутрішньоутробним розвитком і живорождением багатьох аутосомних трисомії. При цьому тяжкість прояви синдромів не залежить від форми анеуплоїдії (повна або мозаїчна) і частки анеупло-ідних клітин в досліджуваній тканині.

Ймовірність виявлення клітин з різним хромосомним набором істотно розрізняється залежно від використовуваного методу приготування препаратів. Однак в будь-якому випадку необхідно визначити, чи є мозаицизм артефактних, тобто виникають в процесі приготування хромосомних препаратів, або він дійсно відображає каріотип плода. На відміну від аутосомних моносомія, які, як правило, обумовлені методичними моментами, моносомия X, а також трисомії по будь-яким хромосомами набору вимагають найпильнішої уваги.

найбільш частими джерелами діагностичних помилок є контамінація зразка і псевдомозаіцізм.

Контамінація зразка материнськими клітинами

Зразки будь-якого ембріонального матеріалу можуть бути контаміновані клітинами материнського походження.

при тривалому культивуванні материнські клітини можуть пролиферировать і приводити до діагностичних помилок. Ризик помилок, обумовлених контамінацією, становить 0,16% при культивуванні клітин АЖівише (до 0,4%) при культивуванні клітин ворсин хоріона. Уникнути помилкових результатів можна лише при скороченні часу культивування або використанні «прямого» методу приготування препаратів.

Щоб уникнути діагностичних помилок при аналізі лімфоцитів пуповинної крові необхідно контролювати чистоту зразка відповідно до методики, заснованої на відмінностях реакції фетального гемоглобіну від забарвлення гемоглобіну дорослих еритроцитів в лужному середовищі.