Трансляція мрнк. Особливості трансляції мрнк при синтезі антитіл

біологічна активність виділених препаратів мРНК оцінюється за їхньою здатністю синтезувати в безклітинних системах відповідні поліпептидні ланцюги. Визначаючи величину синтезу специфічних пептидів по відношенню до всіх знову синтезованим, можна визначити також чистоту препарату мРНК. Необхідною умовою при цьому є використання для мічення білка не якийсь там однієї амінокислоти, але суміші щонайменше з 10 радіоактивних амінокислот і аналіз продуктів синтезу методами з високою роздільною здатністю (наприклад, двовимірне картування пептидів).

Для трансляції мРНК використовують безклітинні системи трьох типів: з асцитної гепатоми Кребса (Swan е. а., 1972- Schechter, 1973). ретикулоцитів кролика (Stavnezer, Huang, 1971- Mach e. a., 1973- Cowan е. а., 1976) і паростків пшениці (Schechter, Burstein, 1976- Storb, Marvin, 1976). Найбільш зручною, мабуть, є остання система. Вихід міченого попередника в ній становить 0,1 пмоль, або 2,6 нг на 0,007 А2во одиниць внесеної мРНК (Schechter, Burstein, 1976).

Оскільки на даному етапі завданням описуваних досліджень є вивчення потенційної трансляційній здатності мРНК, а рослинні і тваринні безклітинні системи в принципі поводяться в цьому відношенні однаково (Schechter, Burstein, 1976), то ступінь придатності і переваг тій чи іншій системи, очевидно, визначається наступними трьома параметрами: величиною ендогенного білкового синтезу (чим нижче, тим краще), доступністю і простотою необхідних інгредієнтів і кількістю мРНК, яку треба внести в систему для отримання достовірного синтезу досліджуваного білка.

Відео: Процес трансляції при пластичному обміні

аналогом бесклеточной системи іноді служать також ооцити жаби. Було показано (Smith е. А., 1973), що введення в ооцити мРНК, що кодує ланцюга імуноглобулінів., Призводить до синтезу цих ланцюгів. Цей метод, однак, більш складний і вимагає значних кількостей мРНК.

Відео: Лекція 3. Транскрипція, трансляція

більшість дослідів по трансляції проведено з мРНК, які кодують синтез L-ланцюгів (L-мРНК), так як їх виділення значно простіше, ніж виділення мРНК, що кодують синтез Н-ланцюгів (Н-мРНК). Вивчення продуктів трансляції мРНК, що кодують L-ланцюга мієломних імуноглобулінів, привело до несподіваного результату. Виявилося, що в безклітинних системах мРНК кодують синтез поліпептидів (попередників), великих за розмірами, ніж зрілі L-ланцюга. Вперше освіту більш важкого продукту під дією 13S мРНК з клітин плазмоцитоми МОРС 41 описали Сван і співавтори (Swan е. А., 1972), під дією 10-14S мРНК з клітин плазмоцитоми МОРС 21 - Мільштейн і співавтори (Milstein е. А., 1972). Молекулярний вага утворюється продукту був більше молекулярного ваги відповідних L-ланцюгів (на 1500), з чого було зроблено висновок про наявність в ньому 15 додаткових амінокислотних залишків.

оскільки при додаванні до бесклеточной системі 355-формілметіонін-тРНК в якості єдиного джерела мітки 355-метіоніл виявлявся у важкому компоненті, було зроблено висновок, що принаймні частина цих додаткових амінокислот розташована на NH2-коіце молекули L-ланцюга (у еукаріотів синтез поліпептидних ланцюгів починається з включення метіоніну) . Надалі дані про синтез попередника були підтверджені в дослідах з мРНК »кодують синтез xL-ланцюгів МОРС 70е (Toncgawa, Baldi, 1973), МРС" (Storb, Marvin, 1976), МОРС 41 (Mach ea, 1973), МОРС 321 ( Schechter, Burstein, 1976), МОРС 63 (Schechter е. а., 1976) і L-ланцюгів МОРС 104Е (Burstein е. а., 1976).