Гібридизація мрнк і днк антитіл. Локалізація v- і з-генів в геномі імуноглобулінів

У дослідах по гібридизації різних мРНК і ДНК, особливо ранніх, як правило, виходили двофазні криві з однією зоною переходу в області низьких і другий - в області високих значень Cot4l.

Використання для пригнічення гібридизації немічених мРНК, кодують L-ланцюга з гомологічними або гетерологічними З-областями, дозволило вже тоді встановити, що високі значення Cotih обумовлені гибридизацией С-генів і що число цих генів не перевищує двох - чотирьох на гаплоїдний геном. Наявність же області з низькими значеннями Coth частиною дослідників розглядалося як доказ наявності значного числа «зародкових» V-генів. Однак підвищення чистоти препаратів мРНК і використання фрагментів мРНК, що містять і не містять Поліани-послідовності, дозволило в останні роки встановити, що V-гени також є унікальними і що вони представлені в геномі в кількості, що не перевищує двох-трьох копій.

Розглянемо як приклад дані дослідів по гібридизації мРНК, кодує синтез ламбда-L-ланцюга мишачої мієломи МОРС 104Е, з ДНК з печінки мишн (Matthyssens е. а., 1976). На підставі даних про первинну структуру V-областей всі досліджені в даний час ламбда-ланцюга мишей (18 зразків) поділені на сім підгруп. Якщо для кожної V-області існує окремий V-ген, то в геномі миші має виявлятися 7 V-генів. Насправді число їх може бути не менш 145 (за цієї умови ймовірність виявлення семи різних підгруп при дослідженні всього 18 зразків підвищується до 90% - при 50% -вої ймовірності число V-генів має бути не менше 25). З кривої гібридизації було визначено, що V-ген для L-ланцюга МОРС 104Е повторюється в геномі не більше 2-3 разів. У той же час ступінь гомології для двох мРНК, що кодують синтез двох ламбда-ланцюгів, що відносяться навіть до двох різних підгрупах (МОРС 104Е і Норс 2020), вельми велика. Екстраполюючи отримані дані на інші мРНК, що кодують ламбда-ланцюга, можна зробити висновок, що при такому схожості V-областей цих ланцюгів L-мРНК МОРС 104Е повинна була б гнбрідізоваться з усіма ними і, отже, значення Cot повинні були б бути значно нижче визначених на досвіді (чим більше повторів, тим нижче значення Cot ,,,). Отримані дані говорять, таким чином, проти наявності в геномі значного числа V-генів і, отже, на користь соматичних мутацій як основного фактора, що забезпечує різноманітність антитіл (імуноглобулінів).

синтез імуноглобулінів

Необхідно, однак, відзначити, що метод гібридизації досить складний і, мабуть, поки не дозволяє однозначно трактувати отримані результати. Так, на відміну від описаних вище дослідів, при використанні кДНК для V- і С-областей окремо (кДНК і кДПКс) була виявлена висока специфічність гібридизації кДНКу з мРНК (Smith, 1977- Stavnezer, Bishop, 1977). Виявилося, що в той час як кДНКс в рівній мірі гибрідизуючою з усіма мРНК, що кодують L-ланцюга каппа-типу, кДНКу вступає в реакцію тільки з гомологичной каппа-мРНК. Це свідчить про те, що визначається методом гібридизації кількість V-генів може бути занижена.

У той же час метод гібридизації виявився вельми корисним для вивчення локалізації V- і С-генів в клітинному геномі. Нещодавно за допомогою цього методу вдалося продемонструвати соматичну реорганізацію генів, що кодують V- і С-ділянки імуноглобулінів. Було показано, що в ембріональному геномі миші V- і С-гсни розділені, в той час як в пухлинних (плазмо-нітом МОРС 321, Норс 2020) вони розташовані поруч (злиті).

криві гібридизації мРНК з ДНК, виділеної з клітин печінки і мієломи, були майже однакові. Це означає, що в клітинах, які продукують імуноглобуліни, не відбувається ампліфікації кодують їх генів.

Таким чином, в даний час встановлено, що в геномі є 2 або 3 гена, що кодують V-області ламбда-ланцюгів, 2 або 3 гена, що кодують V-області каппа-ланцюгів, і 2-4 гени, що кодують С-області L-ланцюгів.

спочатку відбувається з`єднання V- і С-генів, потім цю ділянку ДНК плюс ще 200-450 нетрансльовані нуклеотидів транскрибируются в мРНК, яка після приєднання на 3`-кінці 200 Поліани-нуклеотидів переноситься в цитоплазму і включається до складу полірібосом, де кодує синтез попередників поліпептидних ланцюгів імуноглобулінів.

Після відщеплення від попередників екстрапептідов (А може бути, і до цього) починається збірка молекул імуноглобулінів, перенесення їх в мікросомальні везикули і або секреція, або включення в клітинну мембрану.


Поділитися в соц мережах:

Cхоже