Фагоцитарна активність дендритних клітин. Імунофенотип дендритних клітин

дендритні клітини, отримані з клітин кісткового мозку мишей, були протестовані на здатність до фагоцитозу. Фагоцитарну активність ДК на різних стадіях диференціювання, активованих Іммуновак-ВП-4, АСО і класичним індуктором дозрівання TNF-a, оцінювали по поглинальної здатності щодо штамів S. aureus і S. typhimurium. В якості контролю були використані макрофаги, які отримували з тих же клітин кісткового мозку, шляхом культивування їх з GM-CSF протягом 7 діб.
Незрілі дендритні клітини більш активно фагоцитировали бактерії на відміну від ДК, оброблених Іммуновак-ВП-4, АСО і TNF-a.

Фагоцитарна активність макрофагів і дендритних клітин була в динаміці вивчена щодо S. aureus і S. typhimurium.
Найбільш активними були макрофаги, фагоцитарний індекс у них по відношенню до S. aureus вже через 30 хв інкубації становив 86,0 ± 4,8%, і він залишався на високому рівні протягом трьох годин спостереження.

фагоцитарна активність незрілих ДК і стимульованих імуномодуляторами мікробного походження значно відрізнялися.
При додаванні в середу культивування TNF-a або Іммуновак-ВП-4 (групи 2 і 3) фагоцитарна активність була істотно нижче, причому при додаванні Іммуновак-ВП-4 фагоцитарний індекс був дещо вищим, ніж в разі дозрівання ДК під впливом TNF-a. Під впливом АСО також відзначалося зниження фагоцитозу ДК, однак його рівень був вище в порівнянні з Іммуновак-ВП-4, що може свідчити про наявність в культурі незрілих ДК і макрофагів. При зіставленні ступеня фагоцитозу S. aureus і S. ty-phimurium істотних відмінностей не виявлено.

цілком ймовірно, що більш висока активність поглинання бактерій дендритними клітинами, стимульований Іммуновак-ВП-4 і АСО, обумовлена експресією Toll-подібних рецепторів на ДК і макрофагах, які володіють спорідненістю до патоген-асоційованим структурам бактерій. Після взаємодії з бактеріальними препаратами, ДК переходять в новий функціональний стан, що виражається в зниженні фагоцитарної активності і здатності до більш потужної презентації антигену в порівнянні з макрофагами.

вивчення імунофенотипових характеристик дендритних клітин на різних стадіях їх дозрівання проводили з використанням флюоресцеінізотіоціанат і РЕ-мічених моноклональних антитіл фірми «Caltag», США.

дендритні клітини

Ступінь диференціювання і зрілості дендритних клітин, отриманих з клітин ембріональної печінки мишей, визначали по зміні рівня експресії дифференцировочного молекул CD34, CD38, CD40, CD80, CD86, CD83, F4 / 80, МНС I, МНС II через 3 доби після додавання до незрілим дендритних клітин Іммуновак-ВП-4, бактеріального лизата К. pneumoniae або TNF-a.

Отримані дані свідчать про те, що TNF-a та Іммуновак-ВП-4 в досліджуваних концентраціях стимулювали дозрівання ДК. Однак, судячи з експресії дифференцировочного маркерів, TNF-a активував дозрівання ДК більшою мірою, ніж Іммуновак-ВП-4 і лизат К. pneumoniae. Концентрація 25 мкг / мл Іммуновак-ВП-4 виявилася оптимальною для індукції дозрівання Дк- в цих умовах рівень експресії костімулірующіх молекул був вищим. Однак експресія Р4 / 80-молекул на ДК, стимульованих Іммуновак-ВП-4 і лізатів К. pneumoniae, залишалася підвищеною (23,8 ± 2,6% і 21,2 ± 3,4%, відповідно) в порівнянні з ДК, обробленими TNF-a (0,6 ± 0,2%).

Був досліджений також імунофенотип дендритних клітин, отриманих з клітин кісткового мозку мишей. Як індукторів дозрівання використовували імуномодулятори бактеріального походження - Іммуновак-ВП-4, ГМДП, АСО, а в якості контролю - лизат і ЛПС К. pneumoniae і TNF-a.

Активація клітин з допомогою Іммуновак-ВП-4 і ГМДП приводила до дозрівання клітин. Посилювалася експресія костімулірующіх молекул, адгезивной молекули CD38. При цьому використовуються концентрації Іммуновак-ВП-4 по-різному впливали на рівень МНС. При дозі 25 мкг / мл експресія МНС I була в 2,7 рази більше, ніж при концентрації 50 мкг / мл. Експресія МНС II була високою при обох дозах і не мала суттєвих відмінностей. ГМДП збільшував вміст ДК, що експресують МНС II класу.

Використання лизата і ЛПС К. pneumoniae підвищувало рівень експресії костімулірующіх молекул, молекул антигенного уявлення МНС I і II.

При використанні АСО як індуктора дозрівання ДК експресія маркера CD34 зазнавала істотних змін в залежності від дози. Його динаміка відзначена тільки при максимальних дозах. При застосуванні АСО в дозі 0,3 ЄС / мл збільшувався вміст CD80, CD86, МНС I експресують клітин. Однак рівень CD86 був нижче, ніж при використанні інших індукторів дозрівання. Експресія маркера F4 / 80 на ДК, стимульованих Іммуновак-ВП-4, може бути пов`язана з присутністю у вакцині бактеріальних ЛПС. Ці результати підтверджуються отриманими раніше даними про здатність ДК, оброблених ЛПС, експресувати не тільки антигени зрілих ДК, а й рецептори до ЛПС.

У наступних експериментах вивчали експресію цих маркерів при комбінації імммуномодуляторов мікробного походження (ІММП) з TNF-a. Культивування ДК у присутності GM-CSF і IL-4 з додаванням на шосту добу 2,5 нг / мл TNF-a та ІММП стимулювало дозрівання ДК більшою мірою, ніж ця доза TNF-a, і знижувало в культурі зміст макрофагів. Сам по собі TNF-a в концентрації 2,5 нг / мл (група 3) не викликав дозрівання ДК порівняно з контролем (група 2), маркер незрілості CD34 був вище в 5 разів, F4 / 80 - в 11,4 рази, що свідчить про наявність в культурі істотного відсотка макрофагів. Однак при коінкубаціі 2,5 нг / мл TNF-a з імуномодуляторами відбувалося збільшення експресії адгезивной молекули CD38, костімулірующіх молекул CD40, CD80, CD86, а також МНС I і II класу.

особливо це стосується АСО, оскільки коінкубація його з TNF-a стимулювала експресію поверхневих маркерів, властивих ДК. При цьому знижувався маркер CD34 в порівнянні з незрілими ДК (група 1) в 3,4 рази, збільшувалася експресія адгезивної молекули CD38 в 3,2 рази, костімулірующіх молекул CD40 в 38 разів, CD80 і CD86 майже в 9 разів, МНС I в 2 , 7 і МНС II в 1,5 рази, рівень макрофагального маркера знижувався в 3,6 рази. При внесенні в середу культивування TNF-a та Іммуновак-ВП-4 також виявлена стимуляція ефекту, що виразилося в тому, що істотно збільшилася експресія МНС I і II і знизився вміст F4 / 80 в порівнянні з дією Іммуновак-ВП-4 в тій же дозі (табл. 7). Близько результати отримали при комбінації TNF-a (2,5 нг / мл) і ГМДП, але експресія CD40, CD80, CD86 і МНС II була більше в разі комбінації TNF-a та Іммуновак-ВП-4.
Отримані дані свідчать, що внесення в середу культивування невеликої кількості TNF-a підвищує потенціал дозрівання ДК під впливом імуномодуляторів мікробного походження.


Поділитися в соц мережах:

Cхоже