Основні принципи цитогенетичної пренатальної діагностики.

В даний час проблема цитогенетичної діагностики при будь-якому терміні вагітності практично вирішена. Розроблено надійні і ефективні методи хромосомного аналізу клітин плоду і зародкових оболонок. Залежно від терміну вагітності і завдань дослідження матеріалом для хромосомного аналізу можуть служити клітини АЖ, хоріона, плаценти і лімфоцити пуповинної крові плоду, отримані тим або іншим інвазіни способом. У нашому центрі найбільш часто використовуються клітини хоріона (I триместр) або клітини плаценти (II триместр), отримані за допомогою трансабдоминальной хоріонбіопсіі або плацентоцентеза. Хромосомні препарати з тканин хоріона або плаценти готують прямим або непрямим методами, детально розглянутими раніше в методичних рекомендаціях та відповідному керівництві.

Переваги та недоліки цитогенетичного аналізу при використанні різних методів отримання хромосомних препаратів із зразків плодового матеріалу представлені в табл.

Використання в більшості центрів комплексу цитогенетичних і молекулярно-цитогенетичних методів діагностики дозволяє отримати найбільш повну інформацію про каріотипі плода на різних стадіях внутрішньоутробного розвитку.

Відео: Цитогенетичні дослідження. Біопсія ворсин хоріона вагітності, що завмерла

При пренатальному каріотипування слід керуватися принципами аналізу препаратів хромосом, прийнятими в міжнародній клінічній цитогенетиці і затвердженими Міністерством охорони здоров`я РФ, а також правилами міжнародної номенклатури опису карнотиту.

Особливості цитогенетичного аналізу клітин різного плодового походження Клітини амніотичної рідини Клітини АЖ представлені кількома типами різного походження:
- Клітини амніотичної оболонки (власне амніоцити),
- епітеліальні клітини плоду (епідермісу, травного тракту, сечостатевих і дихальних шляхів, слизової оболонки ротової порожнини).

Відео: Батьківський клуб (25.11.2015 - Частина 1)

Кількісний та якісний склад клітин АЖ, а також концентрація життєздатних клітин мають індивідуальну варіабельність і залежать від стадії розвитку. Оптимальним для цитогенетичних досліджень є амниотический епітелій - активно пролиферирующий клон клітин, специфічний для даної культури. Тим часом точна ідентифікація типів клітин, здатних до мітотичним контрольними позначками і клонообразованію в умовах клітинних культур in vitro, дуже ускладнена.

Найбільш часто для культивування використовують амніотичні клітини, отримані в строк 15-18 тижнів вагітності. Використання для цих цілей амніоцити більш ранніх (12-14 тижнів вагітності) або більш пізніх (після 20 тижнів вагітності) термінів принципово можливо, але, як правило, різко ускладнює і подовжує процес діагностики, збільшує число невдалих спроб.

Стандартне культивування клітин АЖ включає наступні етапи: постановку культури, субкультівірованія, гіпотонічну обробку і фіксацію. Незважаючи на широке використання культур клітин АЖ в світовій практиці, єдиної методики для отримання з них хромосомних препаратів не існує. Для культивування клітин АЖ використовують два основних підходи, що розрізняються за способом отримання колоній і методам фіксації.

Відео: Секвенирование нового покоління: принципи, можливості і перспективи - Марія Логачова

1. Flask-метод-культивування клітин у флаконах і фіксація суспензії монослойной культури після тріпсінізаціі. Аналіз проводять в двох з трьох культур (по 10 метафаз для кожного зразка). Якщо у всіх метафазних пластинках спостерігається однаковий каріотип, діагноз вважається встановленим. У разі виявлення одиничної метафази з аберрантним кариотипом (числовим або структурним), аналізується резервна третя культура. Якщо одна і та ж хромосомная аберація визначається більш, ніж в одній метафазі з одного флакона, але не підтверджується в інших флаконах, ставиться діагноз «псевдомозаіцізм». У разі виявлення однією і тією ж хромосомної аномалії більш ніж в одному флаконі, встановлюється діагноз «істинний мозаїцизм».

2. Метод in situ - культивування і фіксація клітин на покривних стеклах в чашках Петрі або спеціальних флаконах - слайдах. Аналіз проводять за метафазних пластинках з трьох культуральних чашок (всього аналізують 10 колоній). При виявленні аномального клону аналізують всекультури. Хромосомна аберація, яка спостерігається лише в одній чашці, свідчить про «псевдомозаіцізме», більш ніж в одній - про «істинному мозаігшзме».

Процес стандартного культивування амніоцити з моменту отримання зразка АЖ до кариотипирования займає в середньому 14-21 день. До недоліків можна віднести високу вартість культуральних поживних середовищ і обладнання, що важливо для вітчизняних лабораторій, а також високу (до 2%) ймовірність контамінації зразка клітинами материнського походження.

В останні роки розроблено принципово новий підхід до аналізу хромосом з культивованих клітин. Метод «pipett» заснований на мікроманіпуляціонной ізоляції метафазнихіпрометафазнихклетокіз несуспензіонних культур завдяки іхморфологіческім особливостям і ослаблення зв`язку з субстратом. Подальша гипотоническая обробка і фіксація проводяться на одиничних клітинах. Цей спосіб дозволяє скоротити період культивування до несколькіхдней і, що особливо істотно, знизити ризик діагностичних помилок, обумовлених як мозаїцизмом, так і контамінацією зразка. Отримання прометафазних і метафазних пластинок таким способом можливо з будь-яких первинних і перещеплюваних культур. На жаль, дороге устаткування і трудомісткість перешкоджають широкому впровадженню цього прогресивного методу в клінічну практику.