Цитогенетичний аналіз клітин ворсин хоріона плаценти.

Клітини ворсинчатого хоріона (Плаценти), доступні для цитогенетичного аналізу, мають різне походження:
- клітини цитотрофобласту, диференціація якого проісходітна стадії морули;
- клітини мезенхіми, які диференціюються з внутрішньої клітинної маси зародка на стадії бластоцисти.

Відео: Цитогенетичні методи дослідження

для хромосомного аналізу по клітинам хоріона або плаценти використовують два основні методи.

1. Тривале культивування в монослойной культурі. Як і в разі аналізу клітин АЖ, існує велика кількість модифікацій культивування клітин ворсин хоріона. Детальніше ознайомитися з ними можна у відповідній літературі. Відзначимо лише, що зростаючі первинні культури мають гетерогенний клітинний склад з переважним зростанням фібробластоподібних клітин мезенхимальной строми ворсин. Утворення колоній або пухкого монослоя зазвичай відбувається до 10- 12-го дня культивування. Основні принципи аналізу культур клітин ворсин хоріона і інтерпретації результатів аналогічні таким для культур клітин АЖ.

2. «Прямі» препарати ворсин хоріона. Метод аналізу «прямих» препаратів базується на дослідженні спонтанно діляться клітин цитотрофобласту без їх попереднього культивування. Вперше препарати з ворсинчатой тканини хоріона, що містять метафазні пластинки задовільної якості, без використання культури клітин були отримані групою міланських дослідників на чолі з G. Simoiii. У наступні роки були запропоновані різні модифікації методу, які затрагшзают всі етапи обробки ворсин. По суті всі варіанти методу можна розділити на дві групи:
- власне «прямий», заснований на короткочасної (2-3 ч) преінкубаціі нативних ворсин перед гіпотонічній обробкою і фіксацією;
- «променя», Що передбачає збільшення часу інкубації нативних ворсин в культуральному середовищі з поживними добавками до 24,48 або 72 год.

Незважаючи на гадану простоту, ці способи рідко дають стабільні результати і тому, як правило, використовуються в поєднанні з культивуванням. Типовими недоліками описаних варіантів прямого методу є мале число метафазних пластинок, артефактних втрата хромосом при мацерації зразка в оцтової кислоти і мала придатність хромосом для стандартної диференціальної забарвлення барвником Гімза. Підрахунок числа мітозів на «прямих» і «променів» препаратах показав, що при інкубації ворсин протягом 2- 3 сут мітотична активність клітин цитотрофобласту вище, ніж при 2 або 24-годинної інкубації. Це дозволило припустити, що в момент біопсії клітини випробовують «шок», при якому порушуються параметри клітинного циклу, і не вступаютв мітоз.

нами розроблені власні модифікації прямого методу - метод «струшування-отпечативанія» і прискорений прямий метод. Використання великих доз колхіцину з одночасною обробкою в гіпотонічному розчині дозволяє отримувати препарати з хоріона / плаценти в терміни вагітності від 10 до 20нед, що задовольняють всім критеріям кариотипирования. У поєднанні з флуоресцентними методами диференціальної забарвлення хромосом результативність цих методів перевищує 99%.

Відео: Vision Cyto - Традиційна методика проведення цитологічного аналізу

Слід підкреслити, що ці модифікації придатні для приготування препаратів хромосом з тканин з високою природною мітотичної активністю, включаючи будь-які тканини і органи зародка. Інтерфазних ядра, оброблені таким способом, цілком придатні для FISH-методу зі специфічними ДНК-зондами, що важливо при верифікації цитогенетичного пренатального діагнозу. Детально методики приготування препаратів і варіанти диференціальної забарвлення описані нами раніше.

висока ефективність, швидкість і надійність при мінімальній собівартості забезпечили швидке впровадження цих модифікацій в різних пренатальних діагностичних центрах Росії і країн ближнього зарубіжжя.