Діагностика на ізольованих бластомерах. Діагностика патології на стадії бластоцисти.

Діагностика на ізольованих бластомерах дозволяє отримати точну інформацію про генотипі ембріона. В основному біопсія 1-2 бластомерів здійснюється у ембріонів на стадії 8-10 клітин. Оскільки на ранніх стадіях дроблення все бластоміри тотипотентних (тобто взаємозамінні), видалення декількох клітин не позначається на подальшому розвитку ембріона. Методично аналіз одиничних бластомерів від дробящихся зародків прінщЕгшально не відрізняється від аналізу полярних тілець.

Вибір методу молекулярної діагностики визначається специфікою досліджуваної мутації і включає як ПЛР для одночасної детекції кількох мутацій (мультиплексная ПЛР), так і більш складні ДНК-методи. Їх застосування дозволяє проводити діагностику найбільш поширених аутосомно-рецесивних моногенних хвороб - муковісцидозу, таласемії, спінальної м`язової атрофії, хвороби Тея - Сакса, а також аутосомно-домінантних - миотонической дистрофії, синдрому Марфана, хореї Гентингтона і Х-зчеплених - міодистрофії Дюшенна і синдрому ламкою Х-хромосоми.

Цитогенетична доімплантаційна діагностика проводиться на 1-2 бластомерах FISH-методом з використанням ДНК-зондів, специфічних до пріцентромерних районам хромосом 16, 18, 21, 13, X, Y. У випадку гетерозиготного носійства транслокації одним з батьків робляться спроби використання цельнохромосомних ДНК-зондів.

Проблема діагностики гетероплоїдії ускладнюється високою частотою хромосомного мозаицизма на ранніх стадіях ембріогенезу людини. Так, показано, що 38-46% морфологічно нормальних ембріонів на стадії 8-10 клітин мають три і більше анеуплоїдних бластомера. Число бластомеров, що розрізняються за кількістю і набору хромосом, може досягати половини всіх клітин зародка. Оскільки висновок, заснований на аналізі 1-2 клітин, не в повній мірі відображає хромосомний статус формує зародка внаслідок високої частоти аномальної сегрегації хромосом при дробленні зиготи, ймовірність діагностичних помилок велика. Тому ДД може бути рекомендована у випадках високого ризику (25-50%) народження дитини зі спадковою патологією.

Діагностика на стадії бластоцисти є одним з перспективних напрямків ДД. На стадії бластоцисти зародок складається приблизно з 60-100 клітин. При візуалізації трофо- і ембріобласта без шкоди для розвитку ембріона можна видалити до 10 клітин трофобласта. Однак слід враховувати, що культивування ембріонів in vitro в програмах екстракорпорального запліднення (ЕКЗ) рідко доводять до стадії бластоцисти, так як здатність таких ембріонів до імплантації може виявитися істотно зниженою. У той же час частота морфологічно нормальних ембріонів з мозаїчною формою чисельних хромосомних аберацій залишається досить високою і досягає 40%.

Таким чином, основне (і єдине) перевага доімплантаційна діагностики полягає в можливості трансплантації генетично повноцінних ембріонів. Недоліками цього підходу є: методичні труднощі, пов`язані з необхідністю роботи з мікрокількостей матеріалу, обмеження діагностики рамками програм ЗКО і велика ймовірність помилкової діагностики, обумовленої складнощами аналізу одиничних клітин. Перспективи аналізу більшого числа клітин, безумовно, підвищать роздільну здатність методів ДД. Однак при аналізі навіть декількох клітин трофобласта проблема хромосомного мозаицизма залишається невирішеною і, отже, не виключає необхідності проведення подальшої ПД на постімплантаціонних стадіях.

На закінчення відзначимо два основних обставини, які стримують розвиток доімплантаційна діагностики в Росії. По-перше, ці дослідження навіть в найбільш розвинених вітчизняних центрах допоміжних репродуктивних технологій поки знаходяться на стадії наукових розробок. Це означає, що після проведення ДД і настання довгоочікуваної вагітності після трансплантації оперованих зародків на постімплантаціонних стадіях доцільно провести ПД стандартними методами.

По-друге, доімплантаційна діагностика неможлива без наявності високоточного обладнання для молекулярних і цитогенетичних досліджень, прецизійної техніки для мікрохірургічних операцій яйцеклітин і бластоцист, висококваліфікованих фахівців - цитогенетиків, молекулярних біологів і ембріологів і, звичайно, спеціальних високоякісних реактивів, в тому числі хромосом- і локус-специфічних ДНК-зондів і витратних матеріалів. В результаті цього ДД, безумовно, істотно збільшує і без того високу вартість процедури ЕКО і робить її малодоступною для жителів Росії.