Апоптоз при патології шийки матки, асоційованої з вірусом папіломи людини

Відео: ВПЛ асоційовані захворювання

Вступ

Відео: Профілактика ВПЛ асоційованих захворювань шийки матки. Ведення пацієнток після лікування CIN РШМ

Апоптоз, або программірованнаяклеточная загибель, є універсальним фізіологічним процесом, який в комплексі з клітинної диференціюванням і проліфераціейподдержівает гомеостаз на тканинному і соматичному рівнях. Морфологіческіапоптоз характеризується конденсацією хроматину, впячиванием клеточноймембрани, розширенням ЕПР, сморщіваніемцітоплазматіческіх гранул і самих клітин, фрагментацією ядра зутворенням апоптотичних тілець, які потрапляють під внеклеточноепространство. Слідом за цим відбувається досить швидкаелімінація апоптотической клітини її фрагментів фагоцитуючими клітинами.
Апоптоз є процесом, контрольованим і тонко регуліруемиммногочісленнимі факторами. До їх числа відносяться сигнальні молекули, які запускають апоптоз (FAS, TNF, деякі цитокіни), рецепториетіх молекул (FasR, TNFR1, TCR-CD3), внутрішньоклітинні мессенджериполученного сигналу (FADD, TRADD, RIP), онкосупрессори (р53, р21, pRB), протеїнкінази, протеїн, фосфатази, серіновиепротеази (сімейства ICE і Mch), стимулятори апоптозу (Bax, Bcl-xs, Bad, Bak), інгібітори апоптозу (Bcl-2, Bcl-xl та інші), ендонуклеази [1].
Важливим етапом програмованої загибелі клітин являетсяхарактерное розщеплення ДНК на олігонуклеосомние фрагменти [2,3]. Одним з найбільш досліджених ферментів, які беруть участь в межнуклеосомнойфрагментаціі ДНК, є сімейство Ca²⁺/ Mg²⁺-залежних ендонуклеаз (СМЕ) [4-6], зміни актівностікоторих виявлені при різних фізіологічних і патологіческіхпроцессах в організмі [7], в зв`язку з чим ступінь деградації ДНКдо олігонуклеосомние фрагментів, здійснювана СМЕ, счітаетсяоднім з біологічних маркерів інтенсивності апоптозу.
У нормі апоптоз поряд з участю в органогенезу, формоутворення підтримці сталості клітинного складу служить для удаленіяклеток, що зазнали неопластичних трансформацію або імеющіхгенетіческіе чи інші порушення, здатні привести до развітіюрака. Однак відомі патологічні стани, при яких механізмпрограммірованной клітинної загибелі виявляється заблокованим, що призводить до бурхливої проліферації ракових клітин, які не сдержіваемойконкурірующім процесом апоптозу [8, 9]. Зокрема, це относітсяк розвитку передракових процесів і раку шийки матки, в яких, як доведено в останні роки, провідну роль відіграє папілломавіруснаяінфекція [10, 11]. Виявлення наявності вірусу папіломи в половихпутях в останні роки стало можливим завдяки впровадженню сучасних технологій молекулярної біології, таких як ДНК-гібридизація, полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) і ін. Активно впроваджується в практікувисокочувствітельний метод Hybrid Capture, який був разработанфірмой "Digene". Він полягає в ДНК-гібридизації в растворес наступною сорбції на полістероловой планшеті [12]. Благодарятакім методам практичний лікар отримав можливість определятьналічіе високоонкогенних типів вірусу папіломи людини (ВПЛ) в статевих шляхах жінки, що допомагає здійснити правильну тактікулеченія і спостереження кожної конкретної пацієнтки з патологіейшейкі матки і уникнути нерідко непотрібних травмуючих маніпуляцій.

Апоптоз в діагностиці предраковихі ракових захворювань шийки матки

За даними многочісленнихпублікацій, одним з ключових моментів трансформації клеточногороста є взаємодія білків високоонкогенних типів ВПЛ (в першу чергу, Е6) з онкосупрессором р53, що приводить до інгібірованіюпоследнего. Так, L. Rapp і J. Chen спостерігали деградацію р53, наступающуюв результаті зв`язування з ним білка Е6 [13]. Вважають, що E6подавляет активність захисного білка p53, стимулюючи його деградаціюпутем протеолізу, в який залучений асоційований з Е6 белокЕ6АР [14]. Цікаво, що дана функція Е6АР була характернатолько для зразків цервікальної карциноми, але не для нормальногоепітелія.
Аналогічні данниепредставлени в роботі M. Thomas і співавт. [15], які досліджували особливості взаємодії білка Е6 з молекулами-мішенями, що виявляються в образцахцервікальной карциноми. Показано, що на відміну від багатьох другіхопухолей в клітинах цервікального карциноми експресується "дикий" (без мутацій) тип р53, а інактивує роль білка Е6 сопоставімас мутацією р53. У той же час відомо, що в клітинах человекасуществуют молекули, здатні зв`язуватися з Е6, знижуючи в такий спосіб його антиапоптотический потенціал і захищаючи клітини епітеліяот проліферації. Так, один з найбільш ймовірних кандидатів Нароль блокатора Е6 був ідентифікований D. Pim і L. Banks. Биловиявлено, що білок E6-I (інгібітор білка Е6), взаімодействуяс нативним Е6 ВПЛ 18 типу, перешкоджав деградації р53, опосередкованої Е6, і блокував проліфераціюлініі цервікальних ракових клітин. У той же час інгібірованіебелком E6-I трансформованого клітинного росту корреліровалос його здатністю індукувати апоптоз по р53-залежного шляху [16].
Другий основнойонкопротеін вірусу папіломи людини - Е7, що є нарядус Е6 фактором розвитку цервікального раку, надає свій еффектпосредством зв`язування з онкосупрессором білка ретинобластоми (Rb) і його інактивації. S.Seavey і співавт. показали, що такаяспеціалізація Е7 спостерігається при наявності Е6, яка інактивує р53 [17]. Однак в штучно створеної клітинної системі, в которойЕ6 не було, Е7 зв`язувався з р53, стабілізуючи його, що сохранялоего функцію як індуктора транскрипції і активовано продолжітельноеклеточное розподіл і втрату клітинами чутливості до індукцііапоптоза ультрафіолетовим випромінюванням. Навпаки, дані M. Iglesiasі співавт. про підвищення продукції інтерлейкіну-1 нормальними цервікальнимікератіноцітамі при апоптозу і кореляції між рівнями експресії генів ІЛ-1 і Е7 ВПЧ16-го і 18-го типів свідчать про те, що білок Е7 повишаетчувствітельность кератиноцитів до апоптозу [18]. Схожий еффектнаблюдалі G. Kilic і співавт. при дослідженні шляхів регуляції апоптозав культурах клітин раку цервікального каналу (лінія клітин С33а), мутантних по генам р53 і ретинобластоми, інфікованих і не інфіцірованнихонкопротеінамі Е6 і Е7 [19]. Було показано, що різні індукториапоптоза (мітоміцін, стауроспорін, гамма-випромінювання) викликають апоптозво всіх досліджуваних випадках. При цьому наявність в клітинах С33а онкопротеінаЕ7 корелює з підвищенням рівня апоптозу у відповідь на воздействіеіндукторов. Ці дані свідчать про наявність незавісімогоот р53 і ретинобластоми шляху регуляції апоптозу. На користь етоговивода висловлюється також N.Prabhu і співавт., Які виявили, чтоаналог р53 онкосупрессор p73-бета не береться деградації в культурі клітин цервікального карциноми з високим рівнем продукцііЕ6 і не втрачає своєї протективной функції на відміну від р53 [20].
Поряд з дослідженням механізмів онкогенного впливуна клітини епітелію шийки матки білків ВПЛ активно вивчається рольсобственних клітинних факторів організму-господаря, інгібірующіхапоптоз, і їх складної взаємодії з індукторами апоптоза.Поніманіе цих механізмів могло б створити систему захисту епітеліяшейкі матки від розвитку злоякісної проліферації.
Так, в експериментахin vitro показано, що експрессіяпротоонкогена bcl-2 може блокувати апоптоз, опосредованнийp53, в зразках клітинної аденокарциноми піхви і цервікальногоканала. C метою перевірки цього спостереження в системі in situ билопроведено дослідження S.Waggoner і співавт. [21]. У всіх зразках, в яких попередньо було показано налічіегена р53, імуногістохімічно був виявлений білок bcl-2, прічемв 18 з 21 випадку його кількість варіював від помірного довисокого. Незважаючи на присутність дикого типу р53, тільки в 4образцах була відзначена фрагментація ДНК, яка свідчить обапоптозе. На думку авторів, не дивлячись на те, що в результатеповрежденія ДНК при трансформації нормальних цервікальних клетокв ракові спостерігається суперекспрес гена р53, його онкопротектівнийеффект в більшості випадків блокується одночасної експрессіейbcl-2. Таким чином, очевидно, що при карциномі піхви ішейкі матки існує механізм, здатний перешкоджати развітіюапоптоза без мутаційних ушкоджень гена р53. Раніше X. Liangі співавт. показали, що ні в одній з клітинних ліній цервікальнойкарціноми з активною експресією bcl-2 (на відміну від нормальнихкератіноцітов) не визначається функціонально активний білок р53, або представлений мутантом типом, або неактивні путемсвязиванія з білком Е6 ВПЛ [22]. Одночасне підвищення уровняекспрессіі bcl-2 та зниження рівня продукції або активності р53на тлі папіломавірусної інфекції можуть служити важливою предпосилкойразвітія передракових процесів і раку цервікального каналу. Вів же час підвищення експресії bcl-2, можливо, іграетроль не у всіх типах раку шийки матки. Так, в роботі K. Kokawaі співавт. імуногістохімічним методом в зразках інвазивної плоскоклеточнойкарціноми (ІПКК) і інвазивної ендоцервікальної карциноми (ІЕК) білок bcl-2 не було виявлено [23]. Незначна продукція генаBax, що є індуктором апоптозу, була зареєстрована вотдельних клінічних зразках при ІПКК, в той час як у всіхвипадках інвазивної ендоцервікальної карциноми рівень експрессііетого гена був високим, часто поєднуючись з активним апоптозом.Корреляціонний аналіз отриманих даних дозволив авторам зробитивисновок про те, що апоптоз розвивається в ракових клітинах інвазівнойаденокарціноми цервікального каналу в разі високого рівня експрессіігена Bax, що підтверджується результатами інших дослідників [12].
Представлені результати свідчать про разнообразііпутей опосередкованого апоптозом блокування проліферації трансформірованнихклеток епітелію шийки матки. У той же час частота випадків цервікальногорака досить висока, і перехід нормального росту клітин в неопластіческійі раковий нерідко непередбачуваний. У зв`язку з цим велике значеніепріобретают статистичні дослідження, до яких відноситься работаC. Isacson і співавт., Присвячена оцінці кореляційної завісімостімежду активністю проліферативних процесів, інтенсивністю апоптозаі онкогенні ВПЛ в зразках цервікальної неоплазії [24]. Билопоказано, що активність проліферації клітин зростає в мереповишенія ступеня CIN- одночасно з цим увелічіваетсяі кількість клітин, які зазнали апоптозу. Апоптотіческіеклеткі виявлялися в одиничних випадках у зразках CIN I ступеня були відсутні в нормальному епітелії. Статистика cтатистична значімойзавісімості рівня проліферації і апоптозу від ступеня онкогенностіВПЧ показано не було. Про підвищення апоптотического індексу по мерепрогрессіі CIN від низької до високого ступеня свідчать такжеданние Y. Shoji і співавт., Які, крім того, не виявили корреляціімежду рівнем апоптозу і наявністю папіломавірусної інфекції [25] .Пізніше в роботі K. Kokawa і співавт. була досліджена завісімостьмежду рівнем апоптозу і гістологічним типом клітин при інвазівнойцервікальной карциноме [23]. Тканини були отримані від 19 паціентокс ІПКК, 9 пацієнток з інвазивної ендоцервікальної карциномою (ІЕК) і 15 пацієнток з міомою матки. Було показано, що в образцахнормального цервікального епітелію і ІПКК ДНК в основному не разрушается.Інтенсівная специфічна деградація ДНК була виявлена тількипри ІЕК. Проте в зразках як ІПКК, таки ІЕК рівень деградації був значно вище, ніж в нормальномцервікальном епітелії. В експериментах in situ авторами було показано, що клітини, які зазнали апоптозу, переважали серед неопластіческіхклеток при ІЕК. Однак в зразках ІПКК "апоптотических" клетокне було знайдено, за винятком поодиноких екземплярів, локалізованнихв центрах активної проліферації ракових клітин. Ймовірно, етіданние можуть свідчити про відмінності в результаті того або іногоклініческого випадку в залежності від морфологічної прінадлежностіопухолі і рівня апоптозу. Можливо, оцінка ролі цих факторовпомогла б передбачити шляхом прогресії захворювання, посколькуізвестно, що в 60-62% випадках CIN III ступеня регресує безлеченія і тільки не більше ніж в 10% випадків прогресує в карциному.

Використання апоптозу в терапііпредракових і ракових захворювань шийки матки

В даний времяпрактіческі не викликає сумніву, що терапевтичний ефект напредраковие процеси і рак шийки матки можна було б надати, запобігаючи проліферацію трансформованих клітин і індуціруяілі активуючи процес апоптозу. У роботі Y.Tsao і співавт. билаоценена можливість використання в генній терапії цервікальногорака білкового фактора р21, здатного блокувати клітинний ростпутем інгібування циклин-залежної кінази [26]. У клеточниелініі раку шийки матки, інфіковані і не інфіковані ВПЛ, вводили рекомбінантний аденовірус, в який була клонірованануклеотідная послідовність кДНК р21- при цьому було показаноподавленіе клітинного росту шляхом програмованої загибелі раковихклеток, оціненої за рівнем фрагментації ДНК.
У роботі V. Giandomenico і співавт. була проведена оценкаантіпроліфератівного ефекту, що чиниться на дві клітинні лінііплоскоклеточной цервікальної карциноми - ME180 і SiHa трьома способами: 1) рекомбінантним інтерфероном (ІФН) b- 2) ІФНb в поєднанні з ретиноєвої кислотою (РК) - ИФНa [27]. Результати ісследованіяпоказалі, що ІФНbнадає більш виражений вплив на обидві клітинні лінії, ніж ІФНa2b. При цьому застосування РК надавало синергічний з обоімітіпамі ИНФ ефект при впливі на ME180. Було показано, чтоантіпроліфератівний ефект корелює з індукцією апоптозу. Авториполагают, що дія ІФН на ракові клітини опосередковано ІФН-регулірующімфактором-1 і інгібітором циклин-залежної кінази фактором р21, які залучені в придушення клітинного росту і в індукцію апоптозу.
Поряд з опісанниміподходамі до терапії раку шийки матки та профілактики його развитияи тлі СIN і інших захворювань, викликаних папілломавіруснойінфекціей, з використанням р21, ІФНa, ІФНb і РК пропонуються інші методи (часто відпрацьовані толькона клітинних моделях), засновані на застосуванні в якості лекарственногосредства препаратів, що впливають на процеси апоптозу: оксиду мишьякаAs₂O₃[28], N- (4-гідроксифеніл) -ретінаміда [29], атрактілoзіда [30], 5-фторурацилу [31], TGF-b1 [32], інгібіторів циклінзалежної киназ AG 1478 і AG 555 [33] та інших факторів. При цьому, не дивлячись на відмінності як пріродиуказанних препаратів, так і механізмів їх дії, всі вони оказиваюттерапевтіческій ефект, індукуючи апоптоз в трансформірованнихВПЧ кератиноцитах, неопластических і ракових клітинах.
Мабуть, уровеньапоптоза, достатній для підтримки балансу між проліфераціейі елімінацією клітин в нормальної тканини, значно сніжаетсяпрі ракової трансформації, що і призводить до розвитку опухолі.Очевідно, що ефективність терапевтичного впливу зависитот своєчасного визначення порушень механізмів программірованнойклеточной загибелі, які передують формуванню цервікальнойкарціноми. Поряд з морфологічним дослідженням оцінити етінарушенія можна або шляхом визначення численних регуляторнихфакторов апоптозу (при цьому результат аналізу часто не поддаетсяінтерпретаціі), або шляхом визначення активності осуществляющіхдеградацію клітини ефекторних молекул, яка прямо корреліруетс інтенсивністю апоптозу. До числа останніх відносяться ендонуклеази, ферментативна активність яких підвищується при посиленні апоптоза, що призводить до межнуклеосомной деградації ДНК. Одним з наіболееінформатівних сучасних методів оцінки деградації ДНК являетсяпредложенний вперше в 1992 р Y. Gavrieli і співавт. метод TUNEL (від англ. "terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated biotin-dUTP nick-end labeling"), Суть которогозаключается в візуалізації шляхом світлової мікроскопії спеціфіческойокраскі ядер в клітинах з фрагментованим хроматином [34].
Резюмуючи представлену в цій публікації інформацію, слід зазначити, що, незважаючи на складність регуляції процессовпроліфераціі і загибелі клітин, а також на існуючу на сегодняшнійдень невизначеність результату асоційованих з ВПЛ патологіческіхпроцессов в шийці матки, вже запропоновані надійні методи їх определеніяі можливої терапії, засновані на оцінці та індукції процессаапоптоза, розробка та використання яких в найближчому будущемпозволят значно знизити кількість несприятливих ісходовCIN і раку шийки матки.

література:
1. Ярілін А.А. Апоптоз. Природа феномена і його роль в цілісному організмі .// Патол.фізіол.експ. Терапія. 1998- 2: 38-48.
2. Wyllie A.H. Glucocorticoid-induced thymocyteapoptosis is associated with endogenous endonuclease activation.// Nature 1980- 284: 555-6.
3. Wyllie A.H., Morris R.G., Smith A.L., DunlopD. Chromatin cleavage in apoptosis: association with condensedchromatin morphology and dependence on macromolecular synthesis.// J Pathol 1984- 142: 67-77.
4. Khodarev N.N. and Ashwell J.D. An induciblelymphocyte nuclear Ca / Mg-dependent endonuclease associated withapoptosis.// J Immunol 1996- 156: 922-31.
5. Krueger E., Sokolova I., Kamradt M., KhodarevN.N., Vaughan A.T. Multiple forms of endonuclease activity linkedwith radiation induced apoptosis in C4-1 cervical carcinoma cells.// Anticancer Res 1998- 18 (2A): 983-8.
6. Woo K.R., Shu W.P., Kong L., Liu B.C. Tumornecrosis factor mediates apoptosis via Ca ++ / Mg ++ dependent endonucleasewith protein kinase C as a possible mechanism for cytokine resistancein human tenal carcinoma cells.// J Urol 1996- 155 (5): 1779-83.
7. Basnak`ian A.G., Topol `L.Z., Kirsanova I.D., Votrin I.I., Kiselev F.L. Activity of topoisomerase I and endonucleasesin cells transfected by a ras oncogene. // Mol.Biol. (Mosk) 1989-23 (3): 750-7.
8. Cuende E., Ales-Martinez JE, Ding L., Gonzales-GarciaM., Martinez AC, Nunez G. Programmed cell death by bcl-2 dependentand independent mechanisms in B lymphoma cells.// EMBO J 1993-12: +1555 -60.
9. Hale A.J., Smith C.A., Sutherland L.C., StonemanV.E.A., Longthorne V.L., Culhane A.C., Williams G.T. Apoptosis: molecular regulation of cell death. // Eur J Biochem 1996- 236 (1): -26.
10. Pillai MR, Halabi S., McKalip A., JayaprakashP.G., Rajalekshmi TN, Nair MK, Herman B. The presence of humanpapillomavirus-16 / -18 E6, p53, and bcl-2 protein in cervicovaginalsmears from patients with invasive cervical cancer. // CancerEpidemiol Biomarkers Prev 1996- 5 (5): 329-35.
11. Sheets E.E., Yeh J. The role of apoptosisin gynaecological malignancies. // Ann Med 1997 29 (2): 121-6.
12. Nair P., Nair K.M., Jayaprakash P.G., PillaiM.R. Decreased programmed cell death in the uterine cervix associatedwith high risk human papillomavirus infection. // Pathol OncolRes 1999- 5 (2): 95-103.
13. Rapp L., Chen J.J. The papillomavirus E6proteins. // Biochim Biophys Acta 1998- 1378 (1): 1-19.
14. Beer-Romero P., Glass S., Rolfe M. Antisensetargeting of E6AP elevates p53 in HPV-infected cells but not innormal cells. // Oncogene 1997 14 (5): 595-602.
15. Thomas M., Pim D., Banks L. The role ofthe E6-p53 interaction in the molecular pathogenesis of HPV. // Oncogene 1999- 18 (53): 7690-700.
16. Pim D., Banks L. HPV-18 E6 * I protein modulatesthe E6-directed degradation of p53 by binding to full-length HPV-18E6. // Oncogene 1999- 18 (52): 7403-8.
17. Seavey S.E., Holubar M., Saucedo L.J., PerryM.E. The E7 oncoprotein of human papillomavirus type 16 stabilizesp53 through a mechanism independent of p19 (ARF). // J Virol 1999-73 (9): 7590-8.
18. Human papillomavirus type 16 E7 proteinsensitizes cervical keratinocytes to apoptosis and release ofinterleukin-1alpha. / Iglesias M., Yen K., Gaiotti D., HildesheimA., Stoler M.H., Woodworth C.D. // Oncogene 1998- 17 (10): 1195-205.
19. Kilic G., Cardillo M., Ozdemirli M., ArunB. Human papillomavirus 18 oncoproteins E6 and E7 enhance irradiation-and chemotherapeutic agent-induced apoptosis in p53 and Rb mutatedcervical cancer cell lines. // Eur J Gynaecol Oncol 1999- 20 (3): 167-71.
20. Prabhu N.S., Somasundaram K., SatyamoorthyK., Herlyn M., El-Deiry W.S. p73beta, unlike p53, suppresses growthand induces apoptosis of human papillomavirus E6-expressing cancercells. // Int J Oncol 1998- 13 (1): 5-9.
21. Waggoner S.E., Baunoch D.A., Anderson S.A., Leigh F., Zagaja V.G. Bcl-2 protein expression associated withresistance to apoptosis in clear cell adenocarcinomas of the vaginaand cervix expressing wild-type p53. // Ann Surg Oncol 1998- 5 (6): 544-7.
22. Liang X.H., Mungal S., Ayscue A., MeissnerJ.D., Wodnicki P., Hockenbery D., Lockett S., Herman B. Bcl-2protooncogene expression in cervical carcinoma cell lines containinginactive p53. // J Cell Biochem 1995- 57 (3): 509-21.
23. Kokawa K., Shikone T., Otani T., NakanoR. Apoptosis and the expression of Bax and bcl-2 in squamous cellcarcinoma and adenocarcinoma of the uterine cervix. // Cancer 1999-85 (8): 1799-809.
24. Isacson C., Kessis T.D., Hedrick L., ChoK.R. Both cell proliferation and apoptosis increase with lesiongrade in cervical neoplasia but do not correlate with human papillomavirustype. // Cancer Res 1996- 56 (4): 669-74.
25. Shoji Y., Saegusa M., Takano Y., Ohbu M., Okayasu I. Correlation of apoptosis with tumour cell differentiation, progression, and HPV infection in cervical carcinoma. // J ClinPathol 1996- 49 (2): 134-8.
26. Tsao Y.P., Huang S.J., Chang J.L., HsiehJ.T., Pong R.C., Chen S.L. Adenovirus-mediated p21 ((WAF1 / SDII / CIP1)) gene transfer induces apoptosis of human cervical cancer celllines. // J Virol 1999- 73 (6): 4983-90.
27. Giandomenico V., Vaccari G., Fiorucci G., Percario Z., Vannuchi S., Matarrese P., Malorni W., Romeo G., Affabris G.R. Apoptosis and growth inhibition of squamous carcinomacells treated with interferon-alpha, IFN-beta and retinoic acidare associated with induction of the cyclin-dependent kinase inhibitorp21. // Eur Cytokine Netw 1998- 9 (4): 619-31.
28. Zheng J., Deng Y.P., Lin C., Fu M., XiaoP.G., Wu M. Arsenic trioxide induces apoptosis of HPV16 DNA-immortalizedhuman cervical epithelial cells and selectively inhibits viralgene expression. // Int J Cancer 1999 82 (2): 286-92.
29. Oridate N., Suzuki S., Higuchi M., MitchellM.F., Hong W.K., Lotan R. Involvement of reactive oxygen speciesin N- (4-hydroxyphenyl) -retinamide-induced apoptosis in cervicalcarcinoma cells. // J Natl Cancer Inst 1997 89 (16): 1191-8.
30. Brown J., Higo H., McKalip A., Herman B.Human papillomavirus (HPV) 16 E6 sensitizes cells to atractyloside-inducedapoptosis: role of p53, ICE-like proteases and the mitochondrialpermeability transition. // J Cell Biochem 1997 66 (2): 245-55.
31. Ueda M., Kumagai K., Ueki K., Inoki C., Orino I., Ueki M. Growth inhibition and apoptotic cell death inuterine cervical carcinoma cells induced by 5-fluorouracil. // Int J Cancer 1997 71 (4): 668-74.
32. Rorke E.A., Jacobberger J.W. Transforminggrowth factor-beta 1 (TGF beta 1) enhances apoptosis in humanpapillomavirus type 16-immortalized human ectocervical epithelialcells. // Exp Cell Res 1995- 216 (1): 65-72.
33. Ben-Bassat H., Rosenbaum-Mitrani S., HartzstarkZ., Shlomai Z., Kleinberger-Doron N., Gazit A., Plowman G., LevitzkiR., Tsvieli R., Levitzki A. Inhibitors of epidermal growth factorreceptor kinase and of cyclin-dependent kinase 2 activation inducegrowth arrest, differentiation, and apoptosis of human papillomavirus 16-immortalized human keratinocytes. // Cancer Res 1997-57 (17): 3741-50.
34. Gavrieli Y., Sherman Y., Ben-Sasson S.A.Identification of programmed cell death in situ via specific labelingof nuclear DNA fragmentation. // J Cell Biol 1992- 119 (3): 493-501.