Модифікація антитіла після взаємодії з антигеном. Комплементзв`язуючі центри

Схожі результати були отримані при використанні того ж методу з антіполісахаріднимі антитілами. Як антигени використовували олігосахариди зростаючої довжини, в тому числі тетра, гекса- і октасахаріди і 16-членний олигомер. Як і у вищеописаних дослідах, після взаємодії з антигеном спостерігалися зміни спектрів, хоча при використанні ізольованих Fab-або F (аb) 2-фрагментів ці зміни були менш вираженими.

Ці досліди також вказують на існування взаємодії між Fab- і Fc-частинами молекули IgG і відповідних змін в Fc-частини після зв`язування антигену, який має досить великі розміри, щоб заповнити порожнину активного центру. При додаванні невеликого за розмірами гаптена конформаційних змін виявити не вдається.

Великий інтерес в зв`язку з даним питанням про наявність конформаційних змін антитіл викликають роботи, які вказують на можливість аллостеріческіх кооперативних змін між субодиницями молекул антитіл після зв`язування антигену.

Одна серія експериментів, виконана в лабораторії Кошленда (Brown, Koshland, 1975), заснована на дослідженні здатності Fc-фрагмента до фіксації комплементу в результаті зв`язування антитілом антигену. У цих дослідах використовували IgM-антитіла проти бета-лактозіда. Сам по собі цей гаптен НЕ індукував комплементсвязивающіе активність. Тільки після приєднання до неспецифическому білкового носія (РНКаза з одним гаптеном на моль) він набув здатності викликати таку активність.

Оскільки такий антиген був моновалент, то він не міг обумовити агрегацію або поперечну зшивання молекул IgM-антитіл, що, як відомо, може стати причиною активації системи комплементу. Інше пояснення, а саме, що функціонування певних ділянок Fc-фрагментів залежить від конформаційних змін внаслідок зв`язування антигену в активному центрі, є більш вірогідним.
Це пояснення припускає наявність аллостеріческіх властивостей у імуноглобулінів.

при вивченні комплементактівірующей здатності антитіл класу IgG було виявлено, що вона не може бути індукована тими конформаційними змінами Fab- і Fc-субодиниць, які, судячи з даних КПФ, супроводжують зв`язування моновалентного антигену. Однак реакція антитіла з дивалентні антигеном (димер петлевого пептиду лізоциму) надавала антитілу здатність активізувати комплемент.

При цьому спеціально проведені експерименти на аналітичної ультрацентрифуге показали, що така імунна реакція, так само як і в дослідах з моновалентний антигеном, не супроводжується утворенням агрегатів. Автори вважають, що дивалентні антигену необхідна для створення певного співвідношення кутів між Fab- і Fc-фрагментами, при якому можливе експонування комплементсвязивающіх ділянок.

В інших дослідах досліджували здатність кролячих антитіл класу IgG пов`язувати комплемент після реакції з антигенами в залежності від розмірів антигенів. Антитіла отримували імунізацією кролів пневмококовими полісахариди. Антигени представляли собою набір олігосахаридів, виділених з вихідного полісахариду шляхом його спеціальної обробки. У цій системі комплементсвязивающіе активність імунних комплексів виявлялася тільки тоді, коли розмір цукрового олігомеру збільшувався до 21-го цукрового залишку або більше.

седиментаційних аналіз показав, що агрегати, утворені комплексами антиген - антитіло в цьому випадку містять чотири і більше молекул антитіл (Jaton е. а., 1976). У таких агрегатах кути між Fab-суб`едініцаміIgG варіюють від 90 ° до 180 °, в той час як в комплексах, неактивних по відношенню до комплементу, кут між Fab-фрагментами був менше 60 °.

Паралельно методом кругової поляризації флуоресценції була виявлена кореляція між розмірами олігосахарідним гаптена і величиною конформаційних змін в Fc.

Таким чином, можна зробити висновок, що активація комплементсвязивающіх ділянок IgG відбувається в результаті комбінації індукованих антигеном конформаційних змін субодиниць IgG і збільшення кута між Fab-фрагментами більш ніж на 90 °. Можливо, що в IgM друга умова вже існує до зв`язування з антигеном, тому агрегація цих молекул необов`язкова.