Властивості активних центрів антитіл. Реактивність імуноглобулінів

метод спінової мітки дозволив також вловити відмінності у властивостях кролячих антитіл до 2,4,6-трінітрофенілу (ТИФ) після первинної і вторинної імунізації. Ці антитіла досліджували за допомогою відмінних по просторовій структурі спін-мічених ТНФ-гаптенов як методом ЕПР, так і по зменшенню квантового виходу флуоресценції антитіл.

Виявлено, що антитіла, утворені в ході первинного і вторинного імунних відповідей, мають відмінності в будові активних центрів. Комплекси первинних антитіл з гаптенами є менш жорсткими і більш чутливими до дії органічних розчинників і до стеріческім змін лігандів.

Піетт і співробітники (Piette е. А., 1972) досліджували комплекси негативно зарядженого спін-міченого бензоату і комплекси позитивно зарядженого спін-міченого тріметілфеніламмонія з відповідними кролячими антитілами. Судячи з спектрами ЕПР, комплекси антитіл з негативно зарядженими спін-міченими гаптенами є більш жорсткими, ніж комплекси антитіл з позитивно зарядженими спін-міченими гаптенами.
Крім того, було виявлено, що ступінь іммобілізації N-О-групи спін-міченого бензоату в активних центрах антитіл варіювала індивідуально у різних кроликів.

Хсіао і Піетт (Hsia, Piette, 1969) досліджували перехресну реактивність і структурну гетерогенність кролячих анти-ДНФ-антитіл. Вони порівнювали спектри ЕПР антитіл, виділених за допомогою гомологичного ДНФ - (анти-Д) і перехресного гаптена (анти-Т) після взаємодії зі спин-міченим ДНФ (ДНФ-СМ). Aмакс спектра ЕПР комплексу анти-Д і ДНФ-СМ дорівнювала 59 Гс, Амакс спектра комплексу (анти-Т + ДНФ-СМ) - 62 Гс.

Амакс є функцією часу кореляції і полярності оточення N-О-групи (Гамільтон, Мак-Коннел, 1970). Тому відмінності в цих спектрах ЕПР можуть бути обумовлені або більшою иммобилизацией групи N-О в комплексі (анти-Д + ДНФ-ОМ), або більшою гідрофобністю її оточення. У будь-якому випадку вони вказують на структурні відмінності активних центрів анти-Д і анти-Т.

В іншій серії дослідів досліджували комплекси анти-Д з гомологічним ДНФ-СМ і перехресними спін-міченими гаптенами орто- і паранітрофеноламі: ОНФ-СМ і nНФ-СМ. Амакс спектрів ЕПР перехресних спін-мічених гаптенов, АНХ-СМ і ЛНФ-СМ, розташованих в активних центрах, також виявилося більше, ніж у гомологичного ДНФ-СМ.

Автори пояснюють це тим, що гомологічний гаптен розташований в активному центрі таким чином, що N-О-група мітки безпосередньо не взаємодіє з амінокислотними залишками активного центру. З іншого боку, перехресний гаптен утворює менш жорсткий комплекс, при якому мітка має велику ступінь свободи, що дозволяє їй взаємодіяти з гідрофобними ділянками активного центру. Спектри ЕПР спін-мічених перехресних гаптенов відрізняються від гомологичного ще присутністю компонент, відповідних більш швидкого обертання.

Це може бути наслідком існування рівноваги між двома орнентаціямі спін-мечепих гаптенов в активних центрах або неоднакового спорідненості у різних популяцій антитіл, специфічних до відповідного гаптенами.