Преципитат імунних комплексів. Взаємодія доменів в ланцюгах антитіл

стан агрегації імунних комплексів не повинно перешкоджати фіксації на Fc-фрагменті компонентів комплементу і, отже, їх дифузії в преципітатами. Вивчення структури специфічного преципітату антитіл з антигенами було проведено за допомогою спінових міток (Григорян та ін., 1969). Для мічення білка використовували нітроксільний радикал, синтезований на базі малеініміда. Він ковалентно реагував з SH-групами кролячих антитіл після відновлення 2-меркаптоетанолом межцепочечних дисульфідних зв`язків. При цьому активність антитіл зберігалася.

В результаті преципітації спін-мічених антитіл яєчним альбуміном мітка продовжувала обертатися вільно, не відчуваючи стеріческіх перешкод. З іншого боку, неспецифічне осадження спін-мічених антитіл сульфатом амонію призводило до сильної іммобілізації мітки. Ці дані вказують на гратчасту, пухку структуру преципітату, утвореного імунними комплексами.

У дослідах із застосуванням методу кругового дихроїзму були виявлені відмінності в спектрах трьох гомологічних антіпневмококкових антитіл до і після їх взаємодії зі специфічними гексасахарідни-ми лигандами (Jaton е. а., 1975а). Досліджували також зміни в спектрах гомологічних і гібридних рекомбінантов Н і L-ланцюгів під дією гаптена. Гомологічні рекомбінантні антитіла мали спектр, ідентичний спектру нативних антитіл, незважаючи на відсутність межцепьевих S-S-зв`язків.

Зміни в спектрах відбуваються при зв`язуванні гаптена у всіх трьох нативних антитіла, їх Fab-фрагментах і в гомологічних рекомбінантних молекулах. Однак не було виявлено жодних ознак конформаційних змін після взаємодії гаптена з гетсрологічнимі рекомбінантними антитілами. Ці результати підтверджуються зміною квантового виходу флуоресценції антитіл. Вони вказують на високу специфічність межцепьевих взаємодій в імуноглобулінах.

унікальну інформацію про взаємодію доменів в ланцюгах можна отримувати методом спінової мітки. Ця інформація залежить від ділянки її зв`язування білком. Відповідний амінокислотний залишок (або залишки), з яким відбувається зв`язування мітки, визначається її хімічною структурою та умовами мічення (наприклад, рН). У нашій роботі (Kaivarainen, Nezlin, 1967a) білки мітили двома іміноксільнимі радикалами: 2,2,6,6-тетраметил-4-аміно (N-діхлортріазіном) - R, і імідозолідом (2,2,5,5-тетраметил -1-оксілпіроллін-4-карбонова кислота) - R2. Залежно від умов приєднання міток вони могли зв`язуватися з залишками лізину або гістидину.

Спектр ЕПР міток R, і R2 кон`югованих, найімовірніше, з ли-Зіновій залишками білків, представляв собою три вузькі лінії, характерні для слабо іммобізірованной мітки, які не відчуває стер-чеських перешкод з боку макромолекули. На відміну від цих спектрів спектри ЕПР імуноглобулінів G, мічених по R, (імовірно приєднуються до гистидинового залишкам), складаються з п`яти компонент.
такі спектри вказують на здатність мітки знаходитися в двох різних мікрооточення - А і В, що розрізняються по микровязкости.

Подібність форми спектрів ЕПР різних IgG і їх субодиниць, мабуть, обумовлено загальними для всіх них структурними елементами, а саме, доменами, і їх взаємодією. Це припущення підтверджується тим, що у ізольованих протеолізом доменів L-ланцюгів, А-компоненти спектра, відповідні більш іммобілізованих станом мітки, повністю зникають. При цьому важливо відзначити, що за даними фізико-хімічних і імунохімічних методів половини L-ланцюгів (домени) зберігають свою основну просторову структуру, властиву їм у складі інтактних L-ланцюгів.

У дослідах по вивченню взаємодії спін-мічених Rt по гистидинового залишкам антитіл з антигенами використовували виділені кролячі антитіла проти гемоглобіну людини, проти IgG бика і ослячі антитіла проти LgG людини. В умовах нашого експерименту спінові мітки зв`язувалися в основному з Fab-фрагментами. Характер змін спектрів ЕПР спін-мічених антитіл при взаємодії з антигенами не залежав від того, утворювався преципітат чи ні.

У всіх досліджених випадках комплексообразование спін-мічених антитіл з антигенами призводило до збільшення відношення площі А-компонент до площі центральної компоненти в порівнянні з контрольним спектром ЕПР. Крім того, відбувався зсув А-компонент, відповідний збільшенню іммобілізації мітки в А-стані. Оскільки площа А-компонент визначається кількістю мітки в цьому стані, то її збільшення означає збільшення кількості мітки в А-стані або збільшення часу життя цього стану.