Дослідження крові. Аналіз крові

Вміст гемоглобіну, швидкість осідання еритроцитів (ШОЕ) число еритроцитів і лейкоцитів в 1 мкл крові, лейкоцитарна формула (процентний вміст різних груп лейкоцитів), а також кольоровий показник (коефіцієнт, який свідчить про ступінь насичення гемоглобіном еритроцитів) складають дані загального клінічного аналізу крові.
Кров для аналізу береться в ранкові години (необов`язково до сніданку), в поліклінічних же умовах кров слід брати після 10- 15-хвилинного відпочинку.
Для дослідження кров беруть з безіменного пальця лівої руки після ретельної обробки його спиртом. Прокол роблять на бічній поверхні мозкових частини першого фаланга стерильною голкою-скарифікатором, причому площину голки слід розташовувати перпендикулярно малюнку шкіри пальця - в цьому випадку ранка зяє і кров виділяється тривало.

Визначення концентрації гемоглобіну

Серед методів визначення гемоглобіну найбільш широкого поширення набули методи, засновані на колориметрії, т. Е. Визначення інтенсивності забарвлення.
Найбільш простим з них є визначення гемоглобіну за допомогою візуальної колориметрії в гемометра Салі, який представляє собою дерев`яний штатив з центральної градуйованою пробірки, з боків якої розташовані зупинено скляні трубочки з кольоровим стандартом (солянокислий гематин в гліцерині).
У центральну пробірку попередньо наливають 0,1% розчин соляної кислоти до мітки, відповідної 2 або 3 г%, потім обережно вносять (точно!) 0,02 мл крові, взятої з пальця спеціальної піпеткою, яка додається до гемометр. Поверхневим шаром кислоти промивають піпетку і, перемішавши скляною паличкою кров і кислоту, залишають на 5 хв для утворення солянокислого гематина. Потім додаючи дистильовану воду і постійно перемішуючи паличкою, домагаються повного збігу кольору рідини в центральній пробірці зі стандартами. Концентрація гемоглобіну відповідає позначці рівня розчину по нижньому меніску. Концентрацію гемоглобіну можна висловлювати або в г% гемоглобіну або в умовних одиницях. 16,67 г гемоглобіну прийнято за 100 одиниць.
Концентрація гемоглобіну в крові у жінок буває від 11,7 до 15,8 г ° / о або від 117 до 158 г / л, -у чоловіків - від 13,3 до 18 г% або від 133 до 180 г / л.

Взяття крові для підрахунку формених елементів

Для підрахунку формених елементів кров розводять в змішувачах (меланжери) або пробірках, що останнім часом набуло більш широкого застосування.
Для підрахунку еритроцитів кров розводять в 200 разів 3% розчином хлориду натрію-якщо для взяття крові ми користуємося піпеткою від гемометра, обсяг якої 0,02 мл, то ми повинні брати 4 мл розчину хлориду натрію.
Для підрахунку лейкоцитів кров розводять в 20 разів, отже беруть 0,02 мл крові і 0,38 мл 3% підфарбованого розчину метиленової синькою оцтової кислоти, яка необхідна, щоб викликати руйнування еритроцитів.
Взяття крові повинно проводитися з великою точністю, так як при таких невеликих обсягах потрапляння бульбашки повітря або залишку крові на зовнішній стороні піпетки веде до збільшення помилки визначення.
Перед заповненням камери необхідно протерти в камері шліфоване скло так, щоб з`явилися райдужні кільця.
Перед заповненням камери розведену кров ретельно перемішують, так як клітини осідають на стінки пробірки або ампули змішувача, після цього краплю крові вносять під притерте шліфоване скло камери і залишають на 1 хв в спокої для осідання клітин.
Підрахунок формених елементів виробляють при малому збільшенні мікроскопа (об`єктив 8х, окуляр 15Х або 10Х) в затемненому полі зору.

Еритроцити вважають в 5 великих квадратах (16x5 = 80 малих квадратів), розташованих в різних ділянках камери, можна брати квадрати, розташовані по діагоналі.
Рахунком підлягають еритроцити, що лежать всередині квадрата, і ті, які знаходяться на верхній і лівій його сторонах- еритроцити, що лежать на нижній і правій сторонах, не вважають, так як вони відносяться вже до інших квадратах.
Підрахувавши кількість еритроцитів (А) в 5 великих квадратах, знаходять середнє арифметичне число еритроцитів в одному малому квадраті A / 80, т. Е. В 1/4000 мкл. Тому, щоб знайти число еритроцитів в 1 мкл, ми повинні помножити отримане від ділення число на 4000 і на 200 (розведення).

Таким чином, ми отримуємо наступну формулу:

X = A * 4000 * 200/80,

де X - число еритроцитів в 1 мкл, а А - число еритроцитів в 5 великих квадратах.
Якщо ми вважали еритроцити в 5 великих квадратах і розводили кров в 200 раз, то загальний множник для числа А буде 10 000.
Нормальний вміст еритроцитів в крові жінок 4-5 * 10⁶, чоловіків - 4,5-5,5 * 10⁶.
Лейкоцити вважають в 100 великих квадратах, що не розділених на малі, що відповідає 1600 малим. Таким чином, число лейкоцитів, знайдене в 100 квадратах, ділять на 1600, множать на 4000 і на 20 (розведення). В даному випадку для отримання результату досить число полічених лейкоцитів помножити на 50. Нормальний вміст лейкоцитів в крові 5 * 10³ - 8 * 10³ в 1 мкл.

Кольоровий показник крові. Колірним показником крові називають число, яке показує, яке в середньому насичення гемоглобіном окремого еритроцита даної крові в порівнянні з насиченням окремого еритроцита нормальної крові.
За нормальний вміст гемоглобіну беруть 100 одиниць, а нормальна кількість еритроцитів одно 5 000 000.
Величина колірного показника здорових людей коливається від 0,9 до 1,1.
Вивчення мазка периферичної крові. У мазках крові вивчають морфологію еритроцитів і вважають лейкоцитарну формулу, т. Е. Процентне співвідношення між різними видами лейкоцитів.
Для того щоб дослідження було успішним, приготування, фіксація і забарвлення мазків крові повинні проводитися з великою ретельністю.
Для приготування мазка поверхнею чистого, знежиреного скла на відстані 0,5 см від краю предметного скла торкаються до краплі крові у місця проколу на пальці, а потім шліфоване покривне скло поміщають під кутом 45 ° до предметного і підбивають перші до краплі крові так, щоб вона розтікалася по задньому краю покривного скла і легким рухом, без різкого натиску роблять мазок. Мазок повинен закінчуватися на предметному склі «метелочкой». Мазок висушують на повітрі, при висиханні хороший, тонкий мазок має жовте забарвлення.
Простим, гостро відточеним олівцем по середині мазка підписують прізвище хворого і дату дослідження, після цього мазки фіксують в метиловий спирт не менше 5 хв і фарбують за методом Романовського-Гимзе.

Фарба складається з суміші кислого (еозину) і основного (Азур II) барвників. Такий метод забарвлення дає можливість диференціювати клітини. Першим етапом роботи з мазком є оцінка морфології еритроцитів. Для цього вибирають тонке місце, де клітини лежать окремо, а не у вигляді монетних стовпчиків. Нормальні еритроцити - без`ядерні, пофарбовані в рожевий колір клітини, округлі, приблизно однакового діаметра - 7,5 мкм, еритроцити мають форму двояковогнутого диска, тому в мазку мають просвітлення в центрі і більш інтенсивно забарвлену периферію.

{Module дірект4}

Приготування товстої краплі

Для дослідження крові на плазмодії малярії роблять товсту краплю. Кров беруть звичайним способом з м`якоті пальця. До краплі крові, що виступила з місця уколу, торкаються поверхнею предметного скла. Завдані окремо 2-3 краплі розмазують кутом іншого скла. Сухий мазок заливають (без фіксування) фарбою Романовського на 30-40 хв, потім забарвлену краплю обережно споліскують водою і просушують препарат у вертикальному положенні.

Приблизні дані аналізу

Підвищена кількість еритроцитів і гемоглобіну в крові може бути при захворюванні червоних елементів крові - еритреми, тоді число еритроцитів досягає до 9-106 і більше.
Підвищений вміст еритроцитів в крові може виникнути вдруге, т. Е. Тоді, коли немає захворювання червоного листка кровотворення, а кількість еритроцитів підвищується в результаті хвороби інших органів і систем (при декомпенсованому дифузному пневмосклерозі, емфіземи легенів, деяких видах вроджених вад серця, склерозі судин системи легеневої артерії, пороках правого серця, недостатності кровообігу III ступеня та ін.). Цей симптом називається еритроцитоз.
Морфологічно змінені еритроцити з`являються при гіперхромною (мегалобластической) анемії. При цьому в крові знаходять великі еритроцити з великим вмістом гемоглобіну (макроціти), ембріональні еритроцити (мегалобластов), які зазвичай в периферичної крові не зустрічаються. Морфологія еритроцитів змінюється також і при гіпохромною анемії: з`являються малі еритроцити (мікроціти), змінені за своєю формою (пойкілоціти) і еритроцити з малим вмістом гемоглобіну (гіпохромні еритроцити).

Підрахунок лейкоцитарної формули

При підрахунку лейкоцитарної формули необхідно визначення структурних особливостей цитоплазми і ядер клітин. Належність клітини до тієї чи іншої групи визначається на підставі сукупності всіх ознак цитоплазми і ядра.
При підрахунку формули треба дотримуватися одного і того ж способу пересування скла під мікроскопом. Найчастіше застосовується спосіб микроскопирования в 4 місцях мазка. Відомо, що лейкоцити розподіляються в мазку нерівномірно: лімфоцитів по краях менше, ніж в середині, а моноцитів в кінці мазка більше, ніж на початку. Тому при підрахунку лейкоцитарної формули найкраще пересуватися по ламаній лінії, прораховуючи все зустрічаються клітини.
Підрахунок 200 клітин - практичний мінімум для звичайних клінічних досліджень.
Лейкоцити периферичної крові в залежності від наявності або відсутності зернистості в цитоплазмі діляться на гранулоцити (нейтрофільні, еозинофільні, базофільні) і агранулоціти (моноцити і лімфоцити).
нейтрофіли. Розмір клітин 10-12 мкм. Цитоплазма клітин блідо-рожевого кольору з дрібною, рясної, фіолетового кольору зернистістю. У нормі в крові зустрічаються паличкоядерні (2-4%) і сегментоядерні (60-65%) нейтрофіли.
еозинофіли. За величиною клітини такі ж, як нейтрофіли, іноді трохи крупніше, цитоплазма заповнена великими гранулами жовтувато-червоного кольору, ядро зазвичай має два сегменти однакового розміру. Еозинофілів в нормі 2-4%.
базофіли. За розміром це найменший гранулоціт. Ядро неправильної, багатолопатеве форми, займає майже всю клітину, блідо-рожева цитоплазма містить великі темно-фіолетові гранули. Гранули базофілів розчиняються у воді, і іноді в результаті змивання при фарбуванні препарату на місці гранул залишаються змиті безбарвні осередки. У нормі базофілів 0,1%.
лімфоцити. Розмір клітин коливається від 7 до 10 мкм. Ядро компактної структури, округле або бобовидное. Цитоплазма клітин ніжно-блакитна із зоною просвітління навколо ядра (перинуклеарной), іноді в цитоплазмі зустрічаються окремі азурофільние зерна червоно-фіолетового кольору. У периферичної крові в нормі 20-35% лімфоцитів.
Моноцити. Розмір клітин коливається від 12 до 20 мкм. Ядро частіше подковообразной, іноді неправильної форми. Цитоплазма більш обширна ніж у лімфоцитів, попелясто-блакитного кольору з дрібної, ніжною, червонуватою зернистістю.
Моноцитів в нормі 6-8%.
Підвищений вміст в крові лейкоцитів називається - лейкоцитозом, а знижений - лейкопенією.

Забарвлення і підрахунок ретикулоцитів

Ретикулоцити представляють собою молоді еритроцити з тонкою синьою сітківкою або зернистістю в цитоплазмі. Ці клітини характеризують активність червоного кровотворення.
Для виявлення підрахунку ретикулоцитів користуються методом суправітально (прижиттєвої) забарвлення. На предметних стеклах робляться мазки фарби брілліанткрезілблау в абсолютному спирті, а потім на покритому фарбою склі роблять звичайним чином мазок крові і поміщають його на 3-5 хвилин у вологу камеру, після чого сушать і микроскопируют з іммерсійним об`єктивом. У нормі на 1000 еритроцитів зустрічається 8-10 ретикулоцитів, число їх прийнято виражати у відсотках (0,8-1%) або в проміле (8-10% о) по відношенню до еритроцитів.
Ретикулоцити - клітини, які характеризують підвищену вироблення еритроцитів в кістковому мозку.
Вони у великому відсотку з`являються в периферичної крові при гіпохромною анемії ( «злоякісної анемії»), при гемолітичної анемії та ін. Захворюваннях. Знижений вміст ретикулоцитів і повне їх зникнення в периферичної крові спостерігаються при загостренні гіперхромною анемії.

Для попередження агрегації (склеювання) кров`яних пластинок прокол шкіри роблять через краплю 14% розчину сульфату магнію, нанесеної на палець. Кров змішують з магнезією і готують тонкі мазки на предметних стеклах, які потім фіксують і забарвлюють за Романовським протягом 2-х годин.
Визначають кількість кров`яних пластинок на 1000 еритроцитів, а знаючи число еритроцитів в 1 мкл, підраховують число тромбоцитів в 1 мкл крові. У нормі тромбоцитів міститься від 250 000 до 400 000.
Підвищення вмісту в крові тромбоцитів виявляється при еритреми, при захворюваннях селезінки, при деяких формах злоякісних захворювань (наприклад, підшлункової залози). Знижений кількість тромбоцитів виникає при анеміях.

визначення ШОЕ

Швидкість осідання еритроцитів визначається в крові, змішаної в співвідношенні 4: 1 з лімоннокіслим натрієм.
Реакція ставиться в апараті Панченкова. Капіляр Панченкова промивають цитратом натрію, потім набирають цитрат до позначки 50, де стоїть буква Р (реактив) і видувають його в відалевскую пробірку. Цим же капіляром беруть кров двічі до мітки К (кров) і змішують її з цитратом. Змішаної з цитратом кров`ю заповнюють цей же капіляр до поділу 0 і ставлять вертикально в штатив на годину. Через годину відзначають в міліметрах величину стовпчика плазми, що утворився над осілими еритроцитами, що і є мірою швидкості осідання еритроцитів.
У нормі ШОЕ у чоловіків дорівнює 10 мм / год, у жінок-14 мм / год.
Швидкість осідання еритроцитів підвищується при запальних, гострих і хронічних захворюваннях, при злоякісних пухлинах та інших захворюваннях.

Проба на сумісність резус-фактора

В пробірку без цитрату беруть 2-3 мл крові реципієнта, після згортання крові згусток обводять скляною паличкою і кров центрифугують. Дві краплі сироватки з цієї пробірки наносять на чашку Петрі, додають до неї полкаплі крові донора, перемішують і чашку поміщають у водяну баню (42-45 °). Через 10 хв чашку виймають і переглядають на світлі при легкому погойдуванні. Поява аглютинації вкаже на неприпустимість переливання даної крові.