Визначення кількості тромбоцитів в крові

Визначення кількості тромбоцитів - найважливіший метод дослідження, здатний виявити найбільш часте порушення гемостатичного потенціалу крові - тромбоцитопенія. В даний час для визначення числа тромбоцитів є кілька лабораторних технологій (автоматизований, по фоніо і ін.). Найбільшу точність має мікроскопічний метод при підрахунку в камері, проте цей метод вимагає від лікаря-лаборанта досвіду, напруги зору, концентрації уваги.

принцип методу

Принцип методу заснований на визначенні кількості тромбоцитів шляхом їх підрахунку в камері Горяєва звичайної при світловій мікроскопії або за допомогою мікроскопа з фазово-контрастної приставкою після розведення крові і гемолізу еритроцитів розчином оксалату амонію.

З метою підвищити точність мікроскопічного методу число тромбоцитів підраховують в двох камерах, потім обчислюють середню арифметичну.

Реактиви та обладнання

• 1% розчин оксалату амонію.
• Змішувач Салі.
• Камера Горяєва (2 шт.).
• Світловий мікроскоп зі збільшенням х 40 або мікроскоп з фазово-контрастної приставкою (наприклад, КФ-4 або ін.).

Зразки крові для дослідження

Визначення числа тромбоцитів можливо у крові стабілізованої цитратом натрію або нанесеним на стінки пластикової пробірки мелкодисперсним порошком етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕДТА). При використанні мікроскопічного методу краще брати кров на цитрат натрію, щоб виключити вплив ЕДТА на результати підрахунку тромбоцитів.

техніка виконання

У суху пластикову пробірку вносять 1,98 мл 1% оксалату амонію і 0,02 мл крові. Повільно і акуратно перемішують суміш протягом 2 хв, а потім її інкубують протягом 20 хв при кімнатній температурі. Далі заповнюють дві камери Горяєва вмістом пробірки і на 10 хв поміщають їх в чашку Петрі, в якій знаходиться волога марля або змочений фільтр. Після цієї інкубації, яка необхідна для осідання тромбоцитів, підраховують їх число в 25 квадратах. Середню арифметичну результатів підрахунку в двох камерах множать на 1000. При дослідженні цитратной крові результат збільшують на 10% і множать на 1000, що дозволяє коригувати розведення венозної крові розчином натрію цитрату.

Відео: Тромбоцити, плюс підвищені тромбоцити, мінус знижені тромбоцити в аналізах крові

Оцінка результатів дослідження

У здорової людини число тромбоцитів в периферичної крові коливається в досить широкому діапазоні - від 150 до 400 х 109 / л.

Неприпустимо дослідження числа тромбоцитів в охолоджених зразках крові. При гемолізі можливо заниження числа тромбоцитів. У ряді випадків при дослідженні числа тромбоцитів на гематологічних аналізаторах зустрічається так звана псевдотромбоцітопенія, обумовлена агрегацией і угрупованням тромбоцитів в присутності ЕДТА. Цю проблему вирішує забір крові на цитрат натрію.

Для забезпечення контролю якості при підрахунку числа тромбоцитів на гематологічних аналізаторах існують контрольні зразки з різним вмістом цих клітин. Про можливість використання цих зразків для забезпечення контролю якості при підрахунку числа тромбоцитів мікроскопічним методом не існує загальноприйнятих рекомендацій. Для підвищення точності результатів мікроскопічного дослідження слід періодично контролювати відтворюваність результатів визначення числа тромбоцитів різними лаборантами протягом робочого дня і на основі отриманих даних підвищувати точність і знижувати варіацію при виконанні цієї методики Коефіцієнт варіації мікроскопічного методу у досвідчених лаборантів не перевищує 10%.

Відео: Практичні навички з фізіології: Підрахунок числа еритроцитів

Інтерпретація результатів дослідження

У клінічній картині важкого перебігу ідіопатичною тромбоцитопенічна пурпура домінує геморагічний синдром. При вторинних тромбоцитопеніях геморагічний синдром, як правило, помірний, і поєднується з клінічними симптомами основного захворювання, котрі зумовили тромбоцитопению. У тих випадках, коли кількість тромбоцитів менше 100 х 109 / л тривало спостерігається без будь-яких проявів фонового захворювання, слід думати про ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура.

Тромбоцитозах також спостерігаються при мієлопроліферативних захворюваннях. Нерідко на тлі міелопроліфераціей відзначають порушення реологічних властивостей крові за рахунок поліглобуліі. В останньому випадку, а також при числі тромбоцитів понад 700 х 109 / л у пацієнтів підвищується ризик тромбозів. Однак на тлі мієлопроліферативних захворювань, що супроводжуються тромбоцитозом більше 1500 х 109 / л, парадоксально спостерігається геморагічний синдром.

При тромбоцитопенії та наявності геморагічного анамнезу з раннього дитячого віку вельми важливо оцінити розмір тромбоцитів, в т. Ч. MPV (середній обсяг) в мазку крові, а також наявність будь-яких включень в тромбоцити.

причини помилок

• Використання однієї камери, менше число підраховуваних квадратів.
• Неточність градуювання різних змішувачів.
• Помилки преаналітичного етапу дослідження, в т. Ч. Неправильна дозування цитрату при заборі венозної крові.
• Недостатня кваліфікація лаборанта.

Інші аналітичні технології

Практично всі гематологічні аналізатори непогано вимірюють кількість еритроцитів і лейкоцитів в крові, хороші результати точності і відтворюваності демонструє метод визначення концентрації гемоглобіну, реалізований в таких приладах. Однак і в даний час ще зустрічаються зразки аналізаторів, які число тромбоцитів при тромбоцитопеніях підраховують неточно, і, як правило, спостерігається завищення числа тромбоцитів при їх автоматизованому підрахунку. Особливо яскраво цей недолік проявляється при роботі із зразками крові, в яких число тромбоцитів нижче 50 х 109 / л. Цей недолік є наслідком того, що тромбоцити набагато дрібніше інших клітин крові, тому складніше виконати їх коректний підрахунок в тій же камері і такими ж технічними прийомами, що і інші клітини крові. Слід зазначити також, що на показники точності підрахунку тромбоцитів на гематологічному аналізаторі вельми істотний вплив роблять якість і надійність використовуваних калібраторів. Саме тому в складних діагностичних ситуаціях або при глибокої тромбоцитопенії в анамнезі для уточнення числа тромбоцитів слід застосовувати мікроскопічний метод.

Підрахунок клітин крові в забарвлених мазках має низьку точність і відтворюваність, тому він не може бути рекомендований для застосування в сучасних клініках.