Посмертне взяття аналізів у новонароджених. Посмертні біопсії

1. Посмертне взяття крові у новонароджених:
а. Терміново зв`язуються з лабораторією, щоб з`ясувати, чи не залишилася кров після попередніх досліджень. Її слід зберегти. Наявні зразки сироватки або плазми центрифугируют і заморожують, також заморожують невикористані зразки сечі або спинномозкової рідини.
б. Зв`язуються з лабораторією для виявлення будь-яких невикористаних зразків крові, взятих для скринінгу новонароджених.

Якщо це було зроблено раніше, запрошують результати скринінгу новонароджених, в. У разі невідворотна смертельного результату або відмову родичів від заходів для підтримання життя новонародженого проводять забір крові для додаткових досліджень:
(1) Висохлі краплі крові на фільтрувальної папері зберігають при кімнатній температурі, не слід використовувати пластиковий пакет. Кров наносять як мінімум на дві або три карти скринінгу новонароджених.

(2) Цілісна кров:
(А) 5 мл в пробірці з гепарином (після центрифугування протягом 20 хв заморожують при температурі -80 ° С).
(Б) 5 мл в пробірці з ЕДТА (зберігається протягом 48 год при температурі 4 ° С).
(В) 5 мл в пробірці з гепарином натрію (зберігається при кімнатній або температурі 4 ° С протягом 12 годин-використовують для хромосомного аналізу-не заморожує).

2. Посмертний забір сечі у новонароджених:
а. Використовують з метою виявлення органічних кислот і амінокислот.
б. Збирають шляхом катетеризації, методом Крида або при пункції сечового міхура і відразу заморожують. У разі забруднення кров`ю зразок центрифугують, щоб видалити еритроцити, потім заморожують. Після промивання сечового міхура невеликою кількістю стерильного фізіологічного розчину можна отримати невелику кількість сечі для аналізу на органічні кислоти.
в. Ідеальний обсяг для дослідження становить 5-10 мл, проте навіть набагато меншої кількості сечі може бути досить. Для аналізу сечі на органічні кислоти методом газової хроматографії і мас-спектрометрії досить 100 мкл сечі.

3. Посмертне дослідження волосся у новонароджених:
а. Зберігають кілька зрізаних з голови пасом волосся для мікроскопічного аналізу.

4. Посмертне отримання СМЖ у новонароджених:
а. При підозрі на метаболічні захворювання зразок повинна бути взята до настання летального результату і відразу заморозити при температурі -80 ° С.
б. Після смерті СМЖ отримують шляхом проколу переднього джерельця з дотриманням заходів асептики і антісептікі- зразок може знадобитися для діагностики інфекційного захворювання.

Відео: ОГЛЯД ІГРОВОГО КРІСЛА DXRACER / ПОБИЛИ DIKTATORA

5. Посмертна біопсія шкіри у новонароджених:
а. Використовують для мікроскопічного дослідження або отримання культури фибро-бластів. Фібробласти шкіри необхідні для хромосомного аналізу, виділення ДНК з метою виявлення мутацій і ферментного аналізу. Біопсію слід проводити якомога раніше після настання летального результату. Однак в разі взяття зразка шкіри через 2-3 дня після смерті можна отримати життєздатну культуру клітин. З метою досягнення найкращих результатів дослідження слід брати кілька маленьких біопсій з різних місць (шкіри або фасції).
б. Обробляють внутрішню поверхню передпліччя або передню поверхню стегна тампонами зі спиртом кілька разів.
в. Не слід використовувати повідон-йод, оскільки він може погіршувати ріст клітин.
м Використовують інструмент для щипковому біопсії розміром 3 або 5 мм або скальпель для отримання всієї товщі шкіри. Культуру фібробластів також можна отримати з невеликого шматочка ізольованою фасції або в результаті тонкоголкової аспіраційної біопсії.
д. Біоптат поміщають в живильне середовище, наприклад Хенкса, середу MEM або в вірусну транспортну середу. При відсутності таких середовищ використовують стерильний фізіологічний розчин.
е. Транспортують зразок при кімнатній температурі або після охолодження. Не можна заморожувати.
ж. Після отримання культури клітини можна помістити в рідкий азот, де вони збережуться протягом декількох десятиліть і будуть доступні для аналізу.

6. Посмертна біопсія м`язів у новонароджених:
а. При підозрі на м`язову дистрофію або мітохондріальні захворювання проводять біопсію скелетних м`язів не пізніше 2-4 годин після смерті. Чрескожную або інцизійну біопсію виконують на місці. Для проведення залучають невропатолога або хірурга в зв`язку з великим досвідом взяття біопсії.

б. Інцизійна біопсія. Проводять розріз завдовжки 2-3 см над квадратної м`язом стегна і оголюють м`язи. Затискачі накладають до відсікання м`язових волокон, щоб не викликати їх скорочення. Беруть три м`язових волокна. Подальші дії описані нижче:
(1) Поміщають одне м`язове волокно в змочену в фізіологічному розчині серветку «Telfa» (Kendall Company, Mansfield, MA, USA) і заморожують. Не слід занурювати м`язове волокно в фізіологічний розчин. Це волокно використовують для світлової мікроскопії.
(2) Другий зразок опускають в 1,5% глутаровий альдегід / 1% формальдегід в 0,12 М буферном розчині Соренсена і поміщають в холодильну камеру. При її відсутності зразок поміщають в формалін і залишають при кімнатній температурі. При відсутності формаліну і холодильника зразок кладуть на просочену фізіологічним розчином серветку «Telfa» і охолоджують. Дану м`яз досліджують за допомогою світлової мікроскопії.
(3) Третій зразок обертають алюмінієвою фольгою і швидко заморожують в ізопентанів (при його наявності). В якості альтернативи зразок можна заморозити в рідкому азоті або сухому льоду і зберігати при температурі -80 ° С. Цей зразок необхідний для аналізу ферментів. в. Черезшкірна біопсія. Якщо інцизійну біопсію виконати неможливо, отримують три ділянки тканини з центральної частини квадратного м`яза стегна за допомогою черезшкірної методики. Для її виконання використовують Біопсійний голку. Зі зразками проводять ті ж дії, які описані вище.

7. Посмертна біопсія печінки у новонароджених:
а. У разі печінкової недостатності або при підозрі на вроджену ваду метаболізму проводять біопсію печінки відразу після настання смерті. Виконують відкриту клиновидную або чрескожную біопсію при відмові взяття тканини патологоанатомом під час розтину або за згодою родичів на біопсію при відмові від аутопсії. У разі затримки проведення біопсії з яких-небудь причин результати біохімічного аналізу навіть через 72 годин після смертельного результату можуть бути достовірними.
б. Клиновидна біопсія. Проводять розріз шкіри довжиною 2 см нижче краю реберної дуги справа. Зажимами піднімають праву частку печінки і за допомогою скальпеля січуть шматочок у формі клина. Розрізають тканину на кілька частин об`ємом 5 мм 3 і поміщають їх в пластикову Кріопробірки. Заморожують пробірку в рідкому азоті, при його відсутності використовують сухий лід. Зберігають при температурі -280 ° С.

в. Черезшкірна біопсія. Використовують голку Мен-гіні (Allegiance Healthcare Corp., McGraw Park, IL, USA) 16-го або 18-го розміру, голку Джамшиді (Pharmaseal- Baxter Healthcare Corp., Valencia, CA, USA), голку Клацкіна 16-го розміру (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA), ріжучу голку Тру (Travenol Laboratories, Deerfield, IL, USA) або одноразову пружинну голку для біопсії печінки (Monopty- Bard Peripheral Technologies, Covington, GA, USA).
Укладають дитини на спину, позначають місце пункції трохи нижче среднеподмишечной лінії на рівні 9-10-го ребра. Виконують розріз шкіри довжиною 3 мм скальпелем № 11 вище ребра. Приєднують голку до шприца об`ємом 10 мл, наповненому 5 мл фізіологічного розчину.
Випускають з голки повітря і вводять у напрямку печінки через розріз Біопсійний голку паралельно поверхні шкіри спереду, у напрямку до мечоподібного відростка, соску або плечу протилежної кінцівки. Промивають 1 мл фізіологічного розчину канюлю. Просувають голку на 2-3 см, одночасно створюючи в шприці негативний тиск шляхом потягування поршня на 1-2 мл. Витягають голку зі шприцом.
При використанні автоматичної пружинної системи створювати негативний тиск не потрібно. Отримують кілька зразків тканини печінки з середини за допомогою біопсійною голки, продовжують виконувати дії, як описано вище.

8. Плацента і пупковий канатик:
а. При народженні хворої дитини необхідно обов`язково відправляти плаценту на патологоанатомічне дослідження.
б. Дослідження плаценти може забезпечити ключову інформацію про поразку судин матері або плода є наслідком інфекційного ураження матки або патологічної запальної реакції або лізосомальних хворобах.
в. За допомогою дослідження кукси пуповини у новонародженого можна визначити висхідний запалення - «вхідні ворота» інфекційного збудника при сепсисі.