Діагностика стероїдних гормонів. Методи

Відео: Сучасні методи діагностики та лікування захворювань печінки

Для точного вимірювання малих концентрацій стероїдних гормонів і їх метаболітів використовують іммуноаналіз методом конкурентного гальмування иммунопреципитации, або радіоіммуноаналіз (РІА), який був вперше описаний Ялоу і Берсона в 1960 р .. Однак при подальшій розробці цієї методики вчені зіткнулися з деякими труднощами. По-перше, стероїди неіммуногенни і мають схожу структуру - циклопентан-гаптенового ядро з невеликими варіаціями, що утруднює виробництво специфічних антитіл.

стероїди можна зробити імуногенними, приєднавши до них білок-переносник гаптен, а рівень антитіл можна підвищити попередньої імунізацією гаптенами. Однак ділянку стероїду, до якого кон`югується білок, робить істотний вплив на специфічність утворюються антитіл. Так, антитіла, що утворюються при кон`югації альбуміну сироватки бика в положенні 19 демонструють більш високу специфічність у порівнянні з положеннями 3 або 17. Для більш точної клінічної інтерпретації необхідно мати дані по перехресної реактивності кожного антитіла, обраного для даного аналізу.
більшість фірм - Виробників реагентів надають дані по перехресної реактивності своїх антитіл, але вони не завжди надійні і повинні перевіряти ще тієї лабораторією, яка буде проводити аналіз.

По-друге, високоафінні зв`язують білки, що знаходяться в сироватці крові, такі як ПГСГ, конкурують з антитілами і таким чином створюють перешкоди для визначення кількості стероїдних молекул за допомогою РІА. Це призводить до труднощів для прямого виміру і вимагає попередньої екстракції стероїду органічними розчинниками, а часто і його хроматографічної сепарації. У той же час деякі хімікати, наприклад 8-анілінонафталенсульфонат, здатні пригнічувати зв`язування стероїду з білками, що дозволяє безпосередньо виміряти концентрацію стероїду без попередньої екстракції.

Відео: Сучасні нешкідливі методи діагностики стопи і хребта в ортопедіческойм центрі «Юліанна»

прямий аналіз займає мало часу і може бути автоматизований. У продажу є автоматизовані блоки для визначення концентрації естрадіолу, прогестерону і тестостерону, які використовуються в багатьох лабораторіях. Такі аналізи, однак, характеризуються слабкою чутливістю, а при визначенні мінімальних концентрацій - низькою надійністю. У зв`язку з цим їх не рекомендується застосовувати при визначенні надзвичайно малих концентрацій гормону, наприклад естрадіолу у дітей і чоловіків (lt; 100 пг / мл), тестостерону у дітей і жінок (lt; 1,5 нг / мл) [64] і прогестерону під час стимуляції яєчників (lt; 1 нг / мл).

проблема може бути вирішена за допомогою екстракції сироватки гексанетілацетатом (в об`ємному співвідношенні 3: 2) з подальшим її висушуванням і відновленням в бесстероідной сироватці, яка потім піддається аналізу на автоматичному блоці.

застосування газової хроматографії в поєднанні з мас-спектрометрією (ГХ / МС) дозволяє подолати багато недоліків імуноаналізу і вважається більш надійним і точним методом. Однак ГХ / МС проводиться в кілька етапів, включаючи екстракцію розчинника, хроматографічне розділення і хімічну інтерпретацію, які передують інструментальному аналізу, а чутливість ГХ / МС часто виявляється нижчою, ніж у деяких різновидів імуноаналізу. Останнім часом ця методика витісняється рідинної хроматографією в поєднанні з тандемной мас-спектрометрією (ЖХ / ТМС), яка характеризується більш високою чутливістю і продуктивністю в порівнянні з ГХ / МС.

Тепер ця нова технологія вважається еталонною. ЖХ / ТМС використовували для одночасного вимірювання рівнів естрадіолу та естрону в плазмі крові людини без перехресної реактивності. Зазначені методи можуть бути рекомендовані в якості референтних і використовуватися для стандартизації і схвалення іммуноаналітіческіх досліджень, які забезпечують необхідну для клінічних потреб простоту і високу пропускну здатність.