Визначення рівня ЛГ і ФСГ. аналізи

Розробка високоспецифічних іммуноаналізаторов для визначення концентрації гонадотропінів була пов`язана з деякими труднощами через високу гомологичности глікопротеїнових гормонів і необхідності розділяти вільні субодиниці і інтактні гормони. Перехресна реактивність з а-субодиницею унеможливила точне вимірювання рівнів ЛГ і ФСГ за допомогою РІА, що використовує поліклональні антитіла. Крім того, відома мікрогетерогенність гонадотропінів, що знаходяться як в гіпофізі, так і в вільної циркуляції, обумовлена різним ступенем глікозилювання.

варіабельність олігосахарідним складової і загального будови також викликає мікрогетерогенність заряду білка, що призводить до появи сироваткових изоформ, що розділяються при електрофокусірованіі в діапазоні рН 6,5-10,0. Незважаючи на те що клінічне значення цієї мікрогетерогенності циркулюючих изоформ залишається невідомим, вона впливає на иммунореактивность при визначенні їх концентрації за допомогою різних антитіл, що призводить до варіабельності результатів різних імуноаналізі.
Мікрогетерогенна також впливає на біологічну активність, що обумовлює невідповідність результатів імуноаналізі і биотестов.

Інша проблема полягає у відсутності відповідних еталонних препаратів для проведення імунологічних та біологічних тестів. Міжнародний еталонний препарат (МЕП) очищеного людського менопаузального гонадотропіну (лМГ), отриманого із сечі ( «Другий МЕП лМГ»), був затверджений Всесвітньою організацією охорони здоров`я (ВООЗ) широко застосовувався для більшості імунологічних і біологічних тестів. Характеристики МЕП, встановлені біотести, лягли в основу виробництва всіх наступних очищених препаратів гіпофіза, наприклад Міжнародного стандарту (МС) ВООЗ ( «Другий МС»). Більшість промислово випускаються аналізаторів стандартизовані по «Другому МС».

Однак, хоча їх показники біологічної активності і стандартизовані відповідно до МЕП або МС, иммунореактивность різних панелей для аналізу варіює залежно від специфічності використовуваних в них антитіл.

В останні роки були розроблені методики двустадийному спрямованого іммунорадіометріческого (ИРМА) або імунохемілюмінесцентного (ІХА) аналізу, засновані па використанні двох моноклональних антитіл. Ці методики дозволяють обійти багато недоліків РІА. Всі аналізи автоматизовані і виключно точні - похибка наближається до 0,1 мМО / мл. До того ж на їх результати не впливає наявність вільних а-суб`еднніц і вони краще корелюють з біотести. Завдяки своїй високій чутливості ці аналізи можуть проводитися в ранньому пубертатному періоді для виявлення малих концентрацій гормонів.

У біотести на ЛГ використовуються дисперсні клітини Лейдіга мишей / щурів або лінія клітин лейдігоми (МА-10) в культурі, а вимірюється продукція тестостерону in vitro. Такі тести оцінюють біологічну активність циркулюючого ЛГ в фізіологічних умовах. Це важливо, тому що біологічна активність ЛГ змінюється при аномальному Глікозилювання і порушеннях третинної структури його молекули. Поєднання біотеста і РІА дозволяє обчислити співвідношення біоактивності і иммунореактивности, індекс якого добре відображає кількісні зміни молекули ЛГ.

Незважаючи на те що профілі біоактивності і иммунореактивности ЛГ, як правило, тісно корелюють при різних фізіологічних змінах, при деяких патологічних станах між ними спостерігаються істотні розбіжності. Наприклад, инактивирующие мутації гена ЛМР -субодиниці призводять до підвищення імунореактивності ЛГ, але істотно знижують його біологічну активність. У біотести для визначення активності ФСГ in vitro використовуються гранулезние клітини або клітини Сертолі щурів, а вимірюється продукція цАМФ або активність ароматази у відповідь на стимуляцію ФСГ. Чутливість цих тестів становить близько 2,5 мМО / мл. Незважаючи на те що біотести in vitro мають деяку цінність для вивчення фізіології гормонів, їх повсякденне клінічне використання проблематично через трудомісткість і істотних тимчасових витрат.

Вимірювання рівнів ФСГ і ЛГ застосовують в діагностиці функціональних розладів статевих залоз. Підвищена концентрація ФСГ зазвичай спостерігається при яєчникової недостатності, але також зустрічається і у пацієнток з життєздатними фолікулами. Зрідка підвищення рівня гонадотропінів пов`язано з гонадотропінсекретірующімі пухлинами гіпофіза або ектопічними гонадотропінпродуцірующімі пухлинами.

Якщо у пацієнтки з аменореей виявлено підвищення ЛГ при нормальному ФСГ із співвідношенням ЛГ / ФСГ gt; 2 (частий, але необов`язковий ознака), то можна припустити СПКЯ. Низькі рівні цих гормонів зустрічаються при гіпофізарної або гіпоталамічної дисфункції і поєднуються зі зниженням рівня естрадіолу сироватки крові. Для поглибленої оцінки гипофизарного резерву необхідно проведення провокаційних проб з ГнРГ. Концентрація ЛГ і ФСГ визначається через 20 і 60 хв після внутрішньовенного введення 100 мг ГнРГ. Відсутність відповіді на введення ГнРГ зустрічається при гіпогонадотропного гіпогонадізме- однак чутливість і специфічність цього провокаційного тесту низька у пацієнтів, які отримують екзогенні статевістероїди.