Визначення активності системи протеїну з

Ген, відповідальний за синтез протеїну С, локалізований на хромосомі 2 (ql3-ql4). Основна функція цього фізіологічного антикоагулянту полягає в інактивації основних неферментний факторів згортання (FVa, FVIlla).

Відео: Прилад для виведення шлаків і токсинів з організму

У пацієнтів, що мають вроджену недостатність протеїну С, спостерігається схильність до рецидивуючих тромбозів і тромбоемболій. Дефіцит протеїну С успадковується аутосомно, гомозиготи і подвійні гетерозиготи гинуть в ранньому дитячому віці від тромбозів.

принцип методу

Метод заснований на оцінці АПТВ суміші (розведений зразок БТП, дефіцитна по протеїну С плазма, активатор протеїну С, АПТВ-реагент). Протеїн С досліджуваного зразка БТП активують реагентом, отриманим з отрути щитомордника Agkistrodon contortrix. Активоване протеїн З руйнує коагуляційні фактори Va і Villa, що містяться в суміші досліджуваного зразка і додається протеїн-С-дефіцитної плазми, за рахунок чого після додавання кальцію хлориду реєструється подовження АПТВ. При низькій активності протеїну С подовження АПТВ виражено незначно. Розведення каліброваного зразка БТП дозволяють побудувати криву і визначити активність протеїну С.

Відео: ОКСИД АЗОТУ (NO)

Реактиви та обладнання

• Активатор протеїну С (Protac).
• АПТВ-реагент.
• Дефіцитна по протеїну С плазма.
• Розчин кальцію хлориду (0,025 М).
• Буферний розчин.
• Зразок БТП з відомою активністю протеїну С.
• Коагулометр.

Зразки крові для дослідження

Для визначення активності протеїну С використовують БТП.

Далі приготовані калібрувальні зразки і досліджувані проби розводять розчином буфера в співвідношенні 1:10.

Оцінка результатів дослідження

Для побудови калібрувальної кривої необхідний зразок БТП з відомою активністю протеїну С. Для побудови калібрувального графіка використовують час згортання в секундах, отримане при дослідженні розведених калібрувальних зразків з відомою активністю протеїну С.

Інтерпретація результатів дослідження

У клінічній картині при вродженому дефіциті протеїну С домінують рецидиви венозних тромбозів і тромбоемболій. У багатьох пацієнтів виникають шкірні некрози, невиношування вагітності та ін. У новонароджених, що мають дефіцит протеїну С, нерідко спостерігається злоякісна пурпура (purpura fulminans).

Набутий дефіцит протеїну С може бути обумовлений недостатнім синтезом гепатоцитами, підвищеною витратою внаслідок ДВС, лікуванням антикоагулянтами непрямої дії і ін. У деяких пацієнтів з ВА спостерігається завищення його активності.

причини помилок

• Помилки преаналітичного етапу дослідження.
• Попадання в досліджувану кров гепарину з венозного катетера.

Інші аналітичні технології

Функціональну активність протеїну С визначають амідолітіческімі або коагуляційний методиками.

Відео: Д. Мавроді Лекція # 3 "Роль систем секреції білків третього типу в ..."

Для визначення концентрації протеїну С використовують ІФА, проте при порівнянні результатів імунологічних і функціональних методик спостерігається розбіжність результатів у пацієнтів з молекулярними аномаліями протеїну С.

Активність протеїну S

Протеїн S - вітамін К-залежний гликопротеид, який бере участь в якості неферментного кофактора активованого протеїну С в протеолітичної деградації коагуляційних факторів Va і Villa. Ген, відповідальний за синтез протеїну S, розташований на хромосомі 3 людини в положенні pll.l-qll.2. У крові протеїн S представлений в двох варіантах: у вигляді вільного протеїну (близько 40%) і у вигляді пов`язаного з С4Ь-компонентом комплементу (близько 60%). Зниження активності протеїну S збільшує ризик розвитку тромбозів і тромбоемболій.

принцип методу

Функціональні методи базуються на обліку вираженості подовження часу згортання суміші дефіцитної за протеїном S плазми і досліджуваної плазми при введенні в тест-систему активованого протеїну С. Для оцінки часу згортання в подібній тест-системі виробники використовують різні стимулятори коагуляції (отрута гадюки Рассела, АПТВ-реагент , активоване коагуляційний фактор IX або ін.). При нормальному вмісті протеїну S під впливом активованого протеїну С відбувається істотне подовження часу згортання (за рахунок руйнування неферментний факторів коагуляції), тоді як при протеїну S воно виражено значно слабше (за рахунок неефективного руйнування неферментний факторів активованим протеїном С).

Реактиви та обладнання

• Дефіцитна за протеїном S плазма.
• Активує реагент (фосфоліпіди, отрута гадюки Рассела чи інші активатори, нейтралізатор гепарину та ін.)
• Активоване протеїн С.
• Розчин кальцію хлориду (0,025 М).
• Буферний розчин.
• Зразок БТП з відомим вмістом протеїну S.
• Коагулометр.

Зразки крові для дослідження Для визначення активності протеїну S використовують БТП.

Далі приготовані суміші і досліджувані зразки БТП розводять розчином буфера в співвідношенні 1:10.

Методика визначення

Хід визначення активності протеїну S істотно розрізняється при використанні реагентів і обладнання різних виробників, тому послідовність дій лікаря-лаборанта повинна строго відповідати інструкції до набору реагентів і його адаптації до наявного в лабораторії коагулометри.

Оцінка результатів дослідження

Дослідження часу коагуляції розведених зразків БТП з відомою концентрацією протеїну S дозволяє побудувати калібрувальну криву і визначити активність цього фізіологічного антикоагулянту у відсотках від норми.

У здорових людей активність протеїну S знаходиться в діапазоні 60-130%.

Інтерпретація результатів дослідження

Природжений дефіцит протеїну S - рідкісний дефект антикоагулянтного ланки гемостазу. Перший опис дефіциту протеїну S було представлено в 1984 р Н.Р. Schwarz at al. У клінічній картині цього захворювання домінують рецидивні флеботромбози і тромбоемболії. Як і багато інших дефекти антикоагулянтного ланки гемостазу, ця патологія передається аутосомно. Прийнято розрізняти три типи вродженого дефіциту протеїну S.

Варіанти вродженого дефіциту протеїну S

• Тип: I Коаліційний метод: Сніжен- Вільний протеїн S: Сніжен- Загальний протеїн S: Знижено.
• Тип: II Коаліційний метод: Сніжен- Вільний протеїн S: Норма- Загальний протеїн S: Норма.
• Тип: III Коаліційний метод: Сніжен- Вільний протеїн S: Сніжен- Загальний протеїн S: Норма.

I тип характеризується низьким вмістом протеїну S при використанні різних варіантів його імунологічного визначення, а також зниженням його функціональної активності. При II типі дефіциту спостерігається зниження функціональної активності, однак загальна і вільна фракції протеїну S не порушені. III тип проявляється поєднаним зниженням функціональної активності протеїну S і вільної його фракції. Таким чином, для ідентифікації типу дефіциту протеїну S необхідно використовувати коагуляційний і імунологічний методи його визначення.

У клінічній практиці набагато частіше зустрічається придбаний дефіцит протеїну S. Зниження активності протеїну S можна виявити при нефротичному синдромі, вагітності, лікування естрогенами, L-аспарагіназою і ін. У новонароджених з дефіцитом протеїну S спостерігається злоякісна пурпура (purpura fulminans).

причини помилок

• Гепарин з венозного катетера.
• Гемоліз в досліджуваному зразку крові.
• Неправильне дозування цитрату при заборі крові.

Інші аналітичні технології Досить широко поширений метод, заснований на застосуванні ІФА для визначення вільного протеїну S і пов`язаного з С4Ь-компонентом комплементу. Крім того, описані (але не представлені на ринку) функціональні методики визначення цього антикоагулянту, засновані на використанні хромогенних субстратів.