Тест з отрутою гадюки рассела

Одним з перших, хто вивчив вплив отрути гадюки на коагуляцію, був британський дослідник Robert Macfarlane. У нашій країні пріоритет у вивченні механізмів отруєння і розробці діагностичних методів, заснованих на застосуванні отрут плазунів, належить професорам З.С. Баркагану і Л.П. Цивкіной. Саме в Алтайській лабораторії патології гемостазу були розроблені лебетоксовий, ехітоксовий тести і багато інших подібних методики. Було встановлено, що механізми дії отрут різних видів гадюки і гюрзи близькі, однак використання лебеток-вого тесту в багатьох ситуаціях є кращим, оскільки отрута Vipera Lebetina turanica як реагент стабільніший, ніж його аналоги.

У світовій діагностичної практиці найбільш широке поширення отримав діагностичний метод з використанням отрути гадюки Рассела (DRVV). Оскільки коагулаза з цієї отрути здатна вибірково активувати коагуляційний фактор X, визначення часу згортання з використанням зазначеного токсину дозволяє отримати інформацію про ефективність освіти протромбиназного комплексу. Тест є фосфолипид-залежним, тому його досить широко застосовують для виявлення ВА.

принцип методу

Отрута гадюки Рассела здатний навіть в невеликих кількостях обумовити згортання крові за рахунок активації коагуляційного фактора X. Принцип методу заснований на оцінці швидкості утворення згустку фібрину після змішування БТП, реагенту, що містить отруту гадюки Рассела, і кальцію хлориду.

Реактиви та обладнання

• Реагент, що містить отруту гадюки Рассела.
• Розчин кальцію хлориду (0,025 М).
• Коагулометр (при відсутності коагулометри - водяна баня і секундомір).

Зразки крові для дослідження

Для виконання тесту використовують БТП. Оскільки тест фосфолипид-залежний, важливі коректні режим і час проведення центрифугування. Збільшення оборотів центрифугування зразка крові більше 2500 g викликає руйнування клітин крові, тому для ефективного видалення тромбоцитів доцільно використовувати подвійне центрифугування зразків (докладніше див. Додаток 3).

Відео: Укуси змій

техніка виконання

У кюветі коагулометри змішують 0,1 мл досліджуваної плазми і 0,1 мл отрути гадюки Рассела. Далі суміш інкубують протягом 2 хв при температурі +37 ° С. Після інкубації в кювету додають 0,1 мл кальцію хлориду, має температуру +37 ° С, в той же момент включають таймер коагулометри і реєструють час коагуляції.

Оцінка результатів дослідження Оскільки час коагуляції БТП залежить від активності отрут реагенту, оцінюють час згортання не тільки досліджуваної плазми, але і контрольної нормальної БТП. Для виявлення дії інгібіторів волчаночного типу використовують таке розведення реагенту, яке б обумовлювало коагуляцію нормальної плазми в діапазоні 35-50 с.

Інтерпретація результатів дослідження Найбільш часто цей тест застосовують для виявлення ВА. При виявленні порушення часу згортання для формування судження про причини подовження часу коагуляції доцільно використовувати підтверджуючі тести і тести змішування.

Як і багато інших коагуляційні методики, специфічність цього тесту обмежена. Подовження часу згортання спостерігається у хворих з АФС, гіпо-, дис- і афібріно-генеміямі, на тлі застосування антикоагулянтів і в ряді інших порушень.

причини помилок

• Неправильне дозування цитрату при заборі венозної крові.
• Попадання в досліджувану кров гепарину з венозного катетера.
• Гемоліз.
• Відсутність або неефективність системи внутрішнього контролю якості.

Інші аналітичні технології

Здатністю активувати фактор Стюарта-Прауера володіє отрута гюрзи, гадюки звичайної і деякі інші коагулазу. Перераховані реагенти мають різною чутливістю до дії інгібіторів коагуляції і стабільністю при зберіганні.