D димер: що це таке, норма

В результаті дії ферментного комплексу t-PA-плазміноген утворюється фермент, здатний зруйнувати згусток фібрину, - плазмін. В процесі деградації фібрину, здійснюваної цим ключовим ферментом фібринолітичної системи, від протофібрілли (-D = D-E-D = D-E-D = D-) відокремлюються D-димери (-D = D-) і Е-фрагменти (-е-). Оскільки в D-димере є D-D-зв`язку (поперечні зшивання), які відсутні в фібриногену, фібрин-мономере і пухкому фібрин-полімер, підвищення його концентрації в крові свідчить про реалізацію коагуляції і активації фібринолізу.

принцип методу

Принцип методу ELISA заснований на специфічному зв`язуванні D-димера з моноклональними антитілами на поверхні мікропланшетів. Після видалення субстанцій, які не зв`язалися з мікропланшетів, проводиться інкубація з міченими ферментом антитілами (кон`югат). В результаті на поверхні мікропланшетів відбувається приєднання антитіл, мічених ферментом, до вже наявних комплексам D-димер-анти-О-димер. Додається після промивання 3,3 `, 5,5`-тетраметилбензидин дозволяє оцінити активність ферменту по характерному фарбуванню тестируемой суміші. Інтенсивність забарвлення буде пропорційна активності ферменту і, відповідно, кількості аналіту в пробі.

Реактиви та обладнання

• Ферментний кон`югат (кролячі або козячі антитіла, кон`юговані з пероксидазою хрону).
• Мікропланшет з покритими антитілами до D-димеру лунками.
• Калібратор / калібратори.
• Буфер для зразків.
• Промивний буфер.
• Розчин хромогену / субстрату (хромоген - тетраметилбензидин, субстрат - перекис водню).
• Стоп-реагент (0,5 М сірчана кислота).
• Устаткування для виконання ELISA (вошер, рідер для планшетів і ін.).

Дистриб`ютор діагностичного набору реагентів - ЗАТ «Біохіммак».

Зразки крові для дослідження

Як зразок для визначення концентрації D-димера слід використовувати плазму з стабілізованою натрію цитратом цільної крові. Особливості підготовки зразків детально розглянуті в додатку 3.

Відео: Підвищення д-димеру при ЕКЗ (Чи впливає д-димер на імплантацію?)

Методика визначення

Реагенти, що входять до складу набору, і планшет перед аналізом повинні мати кімнатну температуру. Послідовність дій лікаря-лаборанта при визначенні рівня D-димеру повинна строго відповідати інструкції до набору реагентів.

Відео: Експрес-аналізатор кардіомаркери і D-димера RAMP Reader

Оцінка результатів дослідження Для вимірювання концентрації D-димера необхідно використовувати калібровану криву. Калібратори рекомендується досліджувати в дублюючих визначеннях, а також будувати нову калібровану криву для кожної нової серії діагностичного набору. Для побудови калібрувального графіка використовують величини оптичної щільності, отримані при виявленні різних концентрацій D-димеру.

Слід особливо підкреслити, що на момент написання монографії немає загальновизнаного стандарту D-димеру, тому виробники діагностичних наборів використовують різні зразки і одиниці вимірювання для його визначення. Крім традиційного вказівки вагового змісту в одиниці об`єму (мкг / л, нг / мл, мкг / мл, мг / л, нмоль / л), ряд виробників діагностичних наборів рекомендують результати визначення D-димеру оцінювати в одиницях, еквівалентних фібриногену (FEU mg / L).

Відео: Мастило редуктора Болгарки (КШМ)

Цю особливість вельми важливо враховувати, оскільки в різних варіантах представлення результатів дослідження фігурує концентрація (мг / мл), а нормальний діапазон і результати визначення для різних одиниць вимірювання відрізняються приблизно в 2 рази. Найчастіше, в зв`язку з відсутністю єдиного стандарту, відмінності на тлі багатьох патологічних станів (ДВС-синдром, ТЕЛА і ряд інших) при використанні різних варіантів вираження результатів відрізняється більш ніж в 2 рази.

Формула для обчислення результатів визначення концентрації D-димера в одиницях Сі: [нмоль / л] = [мкг / мл] х 5,476. Найбільш часто застосовуються вагові одиниці вимірювання співвідносяться між собою в такий спосіб: 250 нг / мл = 0,25 мкг / мл = 0,25 мг / л = 250 мкг / л.

Нормальний діапазон концентрації D-димера повинен визначатися в кожній лабораторії з урахуванням особливостей обладнання та витратних матеріалів. Нормальний рівень D-димера, що вказується більшістю виробників, становить менше 250 мкг / л, менше 0,5 мг / л FEU. Оскільки період напіввиведення D-димера становить понад 24 год, його рівень досить довго буває стабільним.

Оцінка результатів тесту повинна здійснюватися з урахуванням визначення правильності. Для здійснення контролю якості кожної лабораторії пропонується використовувати контрольні матеріали з урахуванням одиниць виміру, рекомендованих виробником.

Інтерпретація результатів дослідження

Визначення концентрації D-димера часто використовують для виявлення тромбозів і тромбоемболій. Специфічність цього показника по відношенню до тромботическим порушень обмежена, оскільки даний показник зростає і при багатьох інших патологічних станах.

Незважаючи на обмежену специфічність тесту, його інформативність при тромбозах і тромбоемболіях вельми висока, оскільки тест демонструє дуже хороший негативний прогностичний рівень, т. Е. Негативний результат аналізу практично завжди свідчить про відсутність тромбоемболічних процесів.

Високий рівень D-димера необхідно інтерпретувати з урахуванням результатів інших аналізів і клінічної картини захворювання. Цей показник також використовують для оцінки ефективності антитромботичної терапії.

Інші аналітичні технології Крім ELISA, для визначення D-димеру застосовують і інші иммунохимические технології (іммунотурбідіметрія, іммунохемілюмінесценція, латекс-аглютинація, імунохроматографії, мембранна іммунодіффузія). На ринку досить широко представлені напівкількісні методи його визначення. Багато сучасних моделей автоматичних та напівавтоматичних коагулометров здатні кількісно визначити рівень D-димера за допомогою іммунотурбідіметріі.

причини помилок

• Недотримання температурного режиму зберігання.
• Порушення процедури промивання (при ручної промивки потрібно промивати не менше 3-4 разів). Після здійснення промивки осушите планшет на фільтрувальної папері, оскільки рідина, зазвичай залишається в лунках після промивання, може перешкодити дії субстрату і знизити оптичну щільність досліджуваного зразка.
• Змішування реагентів з різних лотів.
• Всередині утворюється конденсат лунок. Для попередження виникнення конденсату не слід розкривати пакет до тих пір, поки він не прогріється до кімнатної температури.