11-Дегідротромбоксан в2: метод визначення

Попередником тромбоксану А₂ служить арахідонової кислоти, яка накопичується в клітинах при активаціїфосфоліпаз. Під дією циклооксигенази-1 арахідоната перетворюється в короткоживучі простагландини G2 і Н2, далі - в тромбоксан А₂. Утворений і вивільняється тромбоксан А₂ викликає швидку необоротну агрегаціютромбоцитів і додатковий спазм судин малого калібру. В процесі метаболізму цієї речовини в печінці утворюється тромбоксан B₂, а далі - 11-дегідротромбоксан B₂, видаляється з організму з сечею.

Оскільки період напіввиведення тромбоксану А "становить лише 30 з, моніторинг продукції цієї речовини in vivo зазвичай проводять побічно, за визначенням тромбоксану В, в плазмі крові або більш стабільного його метаболіти - 11-дегідротромбоксана B₂ - В сечі.

принцип методу

Методики кількісного визначення 11-дегідротром-Боксал B₂ засновані на технологіях EL1SA.

Реактиви та обладнання

• Лунки мікропланшетів, покриті антитілами до 11-дегідротромбоксану B₂.
• Калібратор / калібратори.
• Ферментний кон`югат (кролячі або козячі антитіла, кон`юговані з пероксидазою хрону).
• Буфер для зразків.
• Промивний буфер.
• Розчин хромогену / субстрату (хромоген - тетраметилбензидин, субстрат - перекис водню).
• Стоп-реагент.
• Устаткування для виконання ELISA (вошер, рідер для планшетів і ін.).

Зразки сечі для дослідження

Концентрація 11-дегідротромбоксана B₂ найбільш часто досліджують в ранковій порції сечі. Для попередження утворення тромбоксану і його метаболітів in vitro в зразки сечі додають інгібітори простагландінсінтетази (індометацин або меклофенамовая кислота).

техніка виконання

Послідовність дій лікаря-лаборанта при визначенні рівня 11-дегідротромбоксана B₂ повинна строго відповідати інструкції до набору реагентів. Калібратори рекомендується досліджувати в дублюючих визначеннях і використовувати нову калібровану криву для кожної серії діагностичного набору.

Відео: Як отримати MIDI ноти з треку на Piano Roll в FL Studio за один клік. Як визначити ноти акапелли

Оцінка результатів дослідження

У здорових осіб діапазон концентрацій 11-дегідротром-Боксал B₂ в сечі становить 40-240 нг / ммоль креатиніну (350-2100 нг / г креатиніну). Рекомендується сформувати контрольну групу і самостійно визначити діапазон нормальних значень для кожної лабораторії.

Обов`язково дослідження контрольних зразків з відомою концентрацією 11-дегідротромбоксана B₂.

Інтерпретація результатів дослідження

Рівень 11-дегідротромбоксана B₂ служить найбільш об`єктивним біохімічним показником аспіринорезистентності, про що свідчать високі значення цієї речовини в сечі на тлі лікування препаратами, що містять ацетилсаліцилову кислоту. Навпаки, про чутливість до аспірину, за даними ряду авторів, може свідчити 50% -е зниження рівня 11-дегідротромбоксана B₂ в сечі на фоні прийому всередину 325 мг аспірину на добу.

Визначення 11-дегідротромбоксана В, можливо використовувати для оцінки активації тромбоцитів при різних захворюваннях. Є інформація про зв`язок високих значень 11-дегідротромбоксана B₂ в сечі з розвитком ускладнень атеросклерозу: інфарктів, інсультів та ін., в т. ч. у пацієнтів, які отримують антиагрегантну терапію.

причини помилок

• Гемоліз.
• У зразках сечі, що містять лейкоцити і еритроцити, можливо помилкове завищення рівня 11-дегідротромбоксана B₂.
• Недотримання температурного режиму при зберіганні реагентів.
• Всередині утворюється конденсат лунок (для попередження виникнення конденсату не слід розкривати пакет до тих пір, поки він не прогріється).

Відео: Методи датування. Частина 1. Дендрохронологія

Інші аналітичні технології Визначення рівня 11-дегідротромбоксана B₂ засноване на обліку взаємодії антигену і антитіла, тому для його кількісного обліку розроблені і інші технології, що дозволяють виявити компоненти імунної взаємодії, наприклад радіоіммуноаналіз з міткою I¹²⁵.