Adamts13

Таким чином, в умовах норми ця протеиназа розщеплює фактор Віллебранда і формує його мультімери нормальної і малої молекулярної маси.

Дефіцит ADAMTS13 грає важливу роль в патогенезі тромботической тромбоцитопенічна пурпура (синдром Мошковіца), оскільки при недостатності цієї металлопротеінази великі мультімери фактора Віллебранда обумовлюють неконтрольоване формування мікроагрегатів тромбоцитів, які блокують мікроциркуляцію. В останні роки зниження ADAMTS13 виявляють не тільки при мікроангіопатичною синдромах, а й при хронічному гломерулонефриті, сепсисі, цирозі печінки, ДВС-синдромі і багато іншого.

принцип методу

Принцип методу (ELISA) заснований на специфічному зв`язуванні молекул ADAMTS13 з антитілами на поверхні мікропланшетів. Після видалення субстанцій, які не зв`язалися з мікропланшетів, проводиться інкубація з міченими ферментом антитілами (кон`югат). В результаті на поверхні мікропланшетів відбувається приєднання антитіл, мічених ферментом, до вже наявних комплексам анти-ген-антитіло. Додається після промивання 3,3 `, 5,5`-тетра-метілбензідін дозволяє оцінити активність ферменту по характерному фарбуванню тестируемой суміші. Інтенсивність забарвлення буде пропорційна активності ферменту і, відповідно, кількості ADAMTS13 в пробі.

Відео: TTP ADAMTS13

Реактиви та обладнання

• Лунки мікропланшетів, покриті антитілами до ADAMTS13.
• Буфер для зразків.
• Промивний буфер.
• Розчин хромогену / субстрату (хромоген - тетраметилбензидин, субстрат - перекис водню).
• Стоп-реагент.
• Устаткування для виконання ELISA (вошер, рідер для планшетів і ін.).

Дистриб`ютор діагностичного набору реагентів - ЗАТ «Біохіммак».

Зразки крові для дослідження Як зразок для визначення концентрації ADAMTS13 слід використовувати БТП з стабілізованою натрію цитратом цільної крові.

техніка виконання

Послідовність дій лікаря-лаборанта при визначенні рівня ADAMTS13 повинна строго відповідати інструкції до набору реагентів. Калібратори рекомендується досліджувати в дублюючих визначеннях.

Відео: ADAMTS13 Teil 1

Оцінка результатів дослідження Для визначення концентрації ADAMTS13 необхідно побудувати калібрувальну криву. На калібрувальному графіку відкладають величини оптичної щільності, отримані при вимірюванні калібрувальних зразків. Потім, з`єднавши між собою точки, проводять калібровану криву для визначення концентрації ADAMTS13 ( «point-to-point»). У нормі концентрація ADAMTS13 становить 50-140%.

Інтерпретація результатів дослідження ADAMTS13 - це металлопротеінази, що розщеплює фактор Віллебранда. Низька концентрація і / або зниження активності ADAMTS13 обумовлюють идиопатическую тромботичну тромбоцитопенічна пурпура (синдром Мошковіца). Синдром Мошковіца характеризують п`ять основних клінічних проявів: неврологічні порушення, дисфункція нирок, гемолітична анемія, тромбоцитопенія, лихоманка. Захворювання протікає важко, без патогенетично обгрунтованого лікування смертність досягає 90%. При синдромі Мошковіца нерідко виявляють зниження концентрації ADAMTS13 менше 10%. Однак набагато більш корисним для діагностики цієї патології є визначення активності ADAMTS13, оскільки в цьому випадку крім кількісного зниження можна виявити інгібування цієї металлопротеінази аутоантителами.

Мутації в гені, що контролює синтез ADAMTS13, здатні зумовити часті рецидиви тромботической тромбоцитопенічна пурпура. Клінічні прояви спадкового дефіциту ADAMTS13 називають синдромом Апшоу-Шульмана (Upshaw-Schulman). При цьому синдромі рівень ADAMTS13 становить менше 6-7%.

На момент написання монографії, на жаль, не визначені чіткі диференційні ознаки тромботической тромбоцитопенічна пурпура і гемолітико-уремічного синдрому. Однак більша частина фахівців схиляються до думки, що при гемолітико-уремічний синдром не спостерігається зниження ADAMTS13, тому цей показник дуже значущий для диференціальної діагностики цих загрозливих для життя станів.

причини помилок

• Недотримання температурного режиму зберігання реагентів.
• Порушення процедури промивання (при ручної промивки потрібно промивати не менше 4 разів).
• Змішування реагентів з різних лотів.
• Всередині утворюється конденсат лунок (для попередження виникнення конденсату не слід розкривати пакет до тих пір, поки він не прогріється до кімнатної температури).

Інші аналітичні технології Крім набору реагентів для вимірювання концентрації ADAMTS13 існує методика визначення активності цієї металлопротеінази. Недостатня активність обумовлена мутацією або наявністю аутоантитіл проти ADAMTS13.