Аероалергени. Лікувальні форми алергенів

Відео: Часникова лушпиння. Користь часниковою лушпиння. Лікування часниковою лушпинням

Водно-сольові екстракти

Першими лікувальними алергенами були так звані водно-сольові екстракти (ВСЕ), отримані з пилку рослин.

Епоха застосування ВСЕ для ЗВТ у вітчизняній і зарубіжній практичної алергології почалася з моменту введення специфічної антиалергійною терапії в медицину.

Водно-сольові екстракти набули найширшого розповсюдження. Проте, ризик провокації реакцій анафілактичного типу у хворих, що мають гіперчутливість до лікувального ВСЕ, наявність баластних домішок в препаратах потребувала модифікації лікарських форм алергенів відповідно до їх основним призначенням - антиалергійною терапії.

Основні напрямки в еволюції лікувальних форм алергенів полягали в підвищенні їх профілю безпеки з тим, щоб зменшити ймовірність місцевих і системних ускладнень при введенні хворим. Якість існуючих комерційних препаратів не завжди задовольняє зазначеним вимогам. У зв`язку з цим були зроблені спроби модифікації як ВСЕ, так і окремих білкових фракцій ВСЕ шляхом полімеризації (формальдегідом, глутаровий альдегідом), отриманням сорбованих форм (на L-тирозин, на гідроокису алюмінію), застосуванням форм пролонгованої дії, використанням різноманітних природних і синтетичних носіїв, алерген-містять комплексів.

Однак модифіковані препарати мали певні недоліки, які негативно виявлялися при ЗВТ. Наприклад, алергени, емульгованих у мінеральному маслі, були ефективні, але їх дія призводило до утворення вузликів, що зберігалися кілька років. Сорбованих форми алергенів - комплекс алергену з сорбентом, створений на основі ковалентних хімічних зв`язків, мав стабільністю, був ефективний, дозволяв скоротити курс ін`єкцій з 36 до 8, але підшкірне введення цих препаратів викликало формування на шкірі забарвлених плям.

Якість існуючих комерційних алергенів для специфічної імунотерапії алергічних захворювань не задовольняє тим вимогам, які висувають клініцисти-алергологи терапевтичних засобів як за ступенем їх алергенної активності, так і по можливості стимуляції загальних і місцевих алергічних реакцій у високочутливих пацієнтів.

Подібні ускладнення призводять зазвичай до того, що курс передсезонної специфічної імунотерапії (СІТ) стає більш тривалим. У зв`язку з цим виникають перешкоди для досягнення оптимальної кінцевої дози до початку сезону цвітіння алергенних рослин, що в кінцевому підсумку істотно відбивається на ефективності проведеного лікування у пацієнтів, чутливих до пилку рослин.

Для усунення зазначених недоліків були проведені цілеспрямовані пошуки нових форм лікувальних алергенів. З цією метою водно-сольові екстракти пилку рослин хімічно модифікували формальдегідом, глютаральдегіду, сечовиною, поліетиленгліколем і т.д. В основі виготовлення аллергоіди лежить взаємодія реакційноздатних альдегідних груп з аміногрупами алергену.

Формалінізірованную алерген містить суміш компонентів з різними молекулярними масами, в основному димарів і тримерів, що відбувається за рахунок приєднання до молекули алергену щодо низькомолекулярних азотистих сполук, що обумовлено процесом полімеризації.

Перетворення алергену в аллергоіди шляхом хімічної модифікації в присутності формальдегіду, що приводить до взаємодії високо- і низькомолекулярних компонентів, сприяє збереженню властивостей аллергоіди індукувати синтез антитіл. Ця дія посилюється і за рахунок жорсткої, стабільної структури молекули аллергоіди, стійкої до впливу денатуруючих агентів на відміну від вихідного алергену, а також сприяє пролонгації дії аллергоіди, так як руйнування його в організмі хворого відбуватиметься повільніше. Такий процес з`єднання молекул білка з низькомолекулярними сполуками, що обумовлює збільшення молекулярної маси, вивчався рядом дослідників.

Розробка і лікувальне застосування аллергоіди гостро поставило питання про способи оцінки їх активності в умовах серійного випуску препаратів.

Аналіз робіт з проблеми отримання і контролю алергії-ідних форм алергенів дає підставу підвести підсумок основних досягнень в цьому напрямку і сформулювати головні завдання при проведенні подальших досліджень в цій області.

Виходячи з основних вимог, яким повинен відповідати оптимальний лікувальний алерген, можна відзначити наступні:

• мати низьку алергенних активність;
• зберігати антигенну специфічність нативного алергену;
• володіти імуногенність - стимулювати синтез алерген-нейтралізуючих антитіл.

Відео: Як вилікувати алергію в домашніх умовах. Відгук про лікування алергії апаратом Біомедіс М

Збільшення молекулярної маси аллергоіди обумовлює Адьювантная їх дію на організм. Присутність в інкубаційному середовищі з формальдегідом лізину і аргініну в деяких випадках підвищує імуногенність аллергоіди. Існує думка, що необхідно використовувати в лікувальному препараті якомога більший комплекс антигенів з алергенної активністю, здатних викликати алергічну реакцію хворих. Тут слід зауважити, що незалежно від ступеня очищення вихідного алергену, вдається досягти різкого зниження алергенність і збереження імуногенності в аллергоідной формах алергену.

Не виключено, що деякі білкові сполуки, будучи більш лабільними, ніж головні алергени, інактивуються в процесі формалінізаціі. Відмінності фракційного складу аллергоіди і вихідного алергену, що визначаються в гель-фільтрації та електрофорезі, пояснюються, мабуть, впливом формальдегіду на діалізували екстракт і розвитком процесу конденсації, «зшиває» високо- і низькомолекулярні компоненти вихідного алергену метиленовими містками.

Є підстави вважати, що низькомолекулярні компоненти вихідного алергену не є баластом і необхідно забезпечити їх збереження в аллергоіди.

Н.А.Іллютовіч спостерігала, що зміст специфічних IgG-антитіл у хворих, які лікувалися аллергоіди, в 1,7 рази перевищувало рівень «блокуючих» антитіл у осіб, які отримували алерген.

Виявлено пряму залежність між величинами кінцевих доз і змістом «блокуючих» антитіл у хворих, які лікувалися алергеном.

Зниження алергенність в полімеризованих аллергенах пов`язано, з одного боку, зі зменшенням числа антигенних детермінант в результаті їх реакції з альдегідними групами, а з іншого боку - недоступністю для реагинов інших детермінант, прихованих всередині високомолекулярного полімеру. Позитивний вплив на імуногенність робить збільшення молекулярної маси і створення більш жорстких внутрішньомолекулярних зв`язків.

Виготовлення лікувальних алергенів високого ступеня очищення є дорогим і трудомістким процесом. Це ускладнюється ще й тим, що при алергічних захворюваннях найчастіше спостерігається полісенсібілізаціі до багатьох алергенів різноманітної природи, а очищення кожного з них має свої особливості.

Одним з безперечних достоїнств аллергоідной форм алергену при правильно розробленій схемі ЗВТ є те, що він не викликав системних реакцій, таких як генералізована кропив`янка, свербіж з сухістю в горлі, назальні симптоми з астмою і без неї. При проведенні СІТ алергеном виникають системні реакції усувають призначенням антигістамінних препаратів.

Аллергоіди, отримані в результаті обробки алергену глютаральдегіду, мають ряд недоліків: препарат не є стабільним, після обробки протягом тривалого проміжку часу триває полімеризація і деполимеризация. Невідомий шлях утилізації глютаральдегіду в організмі людини. Реакція полімеризації не контролюється, неможливий спрямований синтез. НВО «Алерген» (м Ставрополь) в даний час освоїв випуск аллергоідной форми Phleum pratenze (тимофіївки).

депоновані форми

Значна увага приділяється депонованих форм лікувальних алергенів. Зокрема, голландська фірма (Haarlem Allergenen Laboratorium B.V.Holland) випускає препарат для специфічної імунотерапії, що має назву Пуретал. Пуретал - аллергоіди пролонгованої дії (Пуретал-трави, Пуретал-дерева, Пуретал-береза, Депотал, Сублівак). Склад: алергени у формі суспензії, адсорбовані на гідроокису алюмінію і хімічно модифіковані за допомогою глутаральдегид. Суміш пилку наступних трав в рівних частках: мітлиця біла, запашний колосок, їжака збірна, райграс багаторічний, французький райграс високий, костриця червона, тонконіг лучний, жито, бухарнік шерстистий, тимофіївка лугова.

Форма відпустки і упаковка: ампула з проколюють пробкою на 3 мл. Це готова лікарська форма, яка не потребує розведення. Принцип дії - в результаті імунотерапії травами Пуретал знижує чутливість до причинно-значущих алергенів на термін від 3 до 5 років. Може бути досягнуто повне вилікування хворих. Пуретал призначається для лікування алергічних захворювань, опосередкованих IgE-антитілами: сінна лихоманка (алергічний риніт), алергічне запалення кон`юнктиви, алергічна бронхіальна астма, обумовлена гіперчутливістю до пилку трав, що входять до складу Пуретала.

Іммунізірующій ефект Пуретала (трави) був продемонстрований в дослідженні подвійним сліпим методом з плацебо-контролем.

Гіпосенсибілізуючий ефект висловлювався зниженням чутливості організму хворого до причинно-значущих алергенів на термін від 3 до 5 років. Застосування лікувального препарату пов`язана з підшкірними ін`єкціями по поданій до препрарату інструкції як перед сезоном цвітіння, так і протягом усього року.

Алергени пролонгованої дії, отримані на основі L-тирозину, відрізнялися низьким ступенем розчинності. У зв`язку з цим модифіковані зазначеним способом ВСЕ не володіли повною мірою якостями, необхідними для здійснення ефективної ЗВТ.

Історія створення модифікованих форм алергенів з метою зниження їх алергенних властивостей включає етап розробки аллергоідной форм на основі обробки водно-сольових екстрактів пилку формаліном. E.Carter (1935) запропонував обробку ВСЕ 0,1% розчином формаліну при температурі 32,5 ° С протягом 2 тижнів. Отриманий препарат Використано автором в передсезонному лікуванні. Алергенні властивості препарату були істотно знижені. Надалі в цьому напрямку були продовжені дослідження D.Marsh, Райкіс, H.A. Іллютовіч 1980-90 (16, 42). В даний час розроблені аллергоідной форми пилкових алергенів, кліщів, домашнього пилу (Dermatophagoides pteronyssinus). Кліщів аллергоіди проявляли знижену алергенних активність.

Ряд провідних фірм світу з виробництва діагностичних і лікувальних форм алергенів, зокрема, фірма Севака (SEVAC), випускають значну кількість найменувань препаратів пилкових, побутових, інсектних, грибкових і ін. Алергенів. Вихідним матеріалом для виробництва діагностичних і лікувальних форм алергенів є сировина органічного (тваринного, рослинного, мікробного) походження.

Алергени підлягають якісної і кількісної стандартизації і консервуються шляхом додавання антисептичний засіб, зазвичай фенолу. Контроль здійснюють лабораторним шляхом (оцінка біологічних і хімічних властивостей) і клінічно. Склад алергенів визначають весооб`емним співвідношенням (вага вихідної сировини до обсягу екстрагуючої рідини). Біологічна активність визначається на підставі концентрації білкового азоту в еквіваленті міжнародної одиниці Кука:
Концентрацію алергену позначають або ступенем розведення (1:10, 1: 100 і т.д. насамперед, у харчових і пилових алергенів), або вмістом PNU (1 PNU, 10 PNU, 100 PNU і т. Д. - У пилкових і мікробних алергенів).

Перш ніж лікувальний алерген буде допущений до клінічного застосування, він повинен пройти необхідні процедури стандартизації, які передбачають контроль якості, визначення алергенної активності, біологічної активності, імуногенності, ступеня чистоти (див. Розділ реального випуску «Аероалергени»). У США регулюючим органом, що здійснює ці процедури, є FDA (Food Drug Administration) - в Європі існують різні регулюючі організації, які дотримуються єдиних встановлених правил відповідно до рекомендацій ВООЗ.

Виробництво лікувальних алергенів має здійснюватися у суворій відповідності до вимог GMP (Good Manufacturing Practice). У нашій країні регулюючим органом є Державний інститут стандартизації і контролю медичних біологічних препаратів (ГИСК) ім. Л.А.Тарасевіча. В даний час існує велика кількість фірм-виробників, що випускають комерційні лікувальні алергени, які широко застосовуються в Європі і США. У нашій країні основними виробниками лікарських алергенів є Інститут вакцин і сироваток ім І.І. Мечникова, НВО «Алерген» (м Ставрополь), хоча до цих пір питання стандартизації та відповідності правилам GMP залишаються не вирішеними.

У зв`язку з цим існуючі вітчизняні модифікації лікувальних алергенів (сорбованих на гідроокису алюмінію, L-тирозин і ін.) Не відповідають повною мірою вимогам, що пред`являються до лікувальних алергенів, і тому в широкій практиці найбільш часто застосовуються стандартні водно-сольові екстракти алергенів і аллергоіди .

У всьому світі широко поширені 2 системи біологічної стандартизації алергенів: 1. A.U. (Allergy Units - алергенні одиниці), яка була розроблена T rkeltaub в лабораторії алергенів FDA в США, де ця система в основному і застосовується для дозування лікувальних алергенів. AU-система заснована на шкірної реакції пацієнта (in vivo), яка виражається в сумарному діаметрі еритеми в мм на внутрішньошкірне титрування аллергена- 2. B.U. (Biological Units - біологічні одиниці) розроблена в Скандинавських країнах, застосовується в Європі, дозволяє вимірювати дозу алергену в біоеквівалентності одиницях, які розраховуються по шкірної реакції при prick-тестуванні. 1000 BU / мл еквівалентні шкірної реакції пацієнта на розчин гістаміну в дозі 10 мг / мл. Крім того, в ряді країн, у тому числі і в нашій країні, застосовуються кількісні одиниці білкового азоту. 1 PNU дорівнює 0,00001 мг білкового азоту в 1 мл, відповідно в еквівалентному співвідношенні 1 PNU = 2,6 TNU або 2 од. NOON.

Діагностичні форми призначені для визначення специфічної гіперчутливості до різних алергенів. З цією метою тестування здійснюють нанесенням алергену на шкіру, кон`юнктиву, слизову оболонку носа, рідко шляхом інгаляції. Орієнтовні проби проводять способом уколу, скарификации, ін`єкції в шкіру (за інструкцією). З метою вибору індивідуальної дози для лікування здійснюють титруванням, при якому вибирають відповідний ряд розведень на підставі орієнтовною проби таким способом: від найслабших концентрацій у висхідному напрямку до найвищих.

Для функціональних тестів (очних, носових і ін.) Алерголог призначає необхідне розведення, керуючись ступенем індивідуальної гіперчутливості хворого. Лікувальні форми алергенів для СІТ готують на підставі кількісної та якісної оцінки діагностичних проб у хворого. Дозування підвищують відповідно до схеми, представленої авторами-розробниками препарату в Інструкції по його застосуванню, затвердженої контролюючими виробництво організаціями. Однак провідним орієнтиром в підвищенні дози лікарської форми алергену при ЗВТ є алергічний відповідь пацієнта на введення препарату.

Лікар повинен бути готовий до купірування можливих ускладнень (відповідне технічне і медикаментозне оснащення, все для протишокових заходів), уважно оцінюючи попередню реакцію хворого на алерген. Можливі типи реакцій на введення діагностичних і лікувальних форм алергенів: місцева, загальна, синдромная (конституціональна і купирующая - відповідно до Інструкції на препарати фірми SЕVАС, див. ЗВТ (ризик побічних реакцій). Пошуки оптимальних способів отримання високоефективних лікувальних форм препаратів тривають і в даний час, отриманий ряд так званих перспективних лікувальних форм, які названі вакцинами майбутнього (табл. 6).


На основі сучасних даних про участь Т-клітинних епітопів алергенної молекули в стимуляції IgЕ-відповіді спрямованість пошукових робіт зі створення високоефективних «лікувальних» алергенів для СІТ визначається з одного боку розробкою способів модифікації Т-клітинних епітопів алергенної молекули з метою відтворення толерантності Т-клітин до причинно-значимого алергену, з іншого - пошуком способів блокади в-клітинних епітопів і відповідно зміни процесингу алергену в антиген-що представляють клітинах і ін.

На моделі овальбуміна методом його сукцінілірованія отримана нова форма алергену, яка показала в експерименті на тварин здатність активації аллергенспецифических Тh1-клітинних клонів, що в кінцевому підсумку свідчить про здатність препарату змінювати перебіг алергічного процесу в бік одужання. Раніше запропонований новий принцип модифікації антигенів шляхом приєднання білкових антигенів до синтетичного поліелектроліти, котрий володіє здатністю до багатоточковому кооперативному взаємодії з білками, представленими на поверхні иммуноцитов, що дозволило отримати сильну імунну відповідь на антигенну частину комплексу незалежно від генотипу імунізованих особини.

Ці результати послужили основою для створення нового наукового напрямку по розробці лікувальних препаратів з використанням зазначених поліелектролітів. В Інституті імунології МОЗ РФ протягом ряду років здійснювалися роботи по направленої модуляції властивостей антигенів і алергенів. Виконана серія робіт по пролонгованих білків шляхом створення препаратів на основі комплексу алергенів з иммуностимулятором - полиоксидонием. Важливим етапом у вирішенні питання про використання поліелектролітів в створенні аллерговакцинами комплексів були спостереження співробітників Інституту імунології МЗРФ, які показали, що імуностимулюючу дію поліелектролітів не розподіляється продукцію алергічних антитіл.

Було зроблено висновок про те, що кон`юговані з поліелектроліти антигени (алергени) можуть становити інтерес і для розробки способів контролю алергії. Цей напрямок робіт визначило нові підходи до модифікації алергенів і отримання ефективних протиалергічних препаратів. Була сформульована задача створення аллерговакцин зі зниженими алергенними властивостями, що володіють високою иммуногенной активністю - протиалергічну дію. Дослідження в цьому напрямку дозволили створити пилкові алерговакцини нового покоління.

В результаті ЗВТ зазначеними аллерговакцинами знизилася чутливість ефекторних тканин сенсибилизированного організму до причинно-значущих алергенів, отримані позитивні показники і за іншими критеріями ЗВТ, які підтвердили ефект впливу лікувальних алергенів на Т-клітини імунної системи, яким, як відомо, відводиться при алергопатологією головна роль в стимуляції синтезу IgЕ-антитіл і алергічному запаленні. Таким чином, результати проведеного аналізу свідчать про початок нової епохи в розробці високоефективних антиаллергических препаратів на основі методів молекулярної імунологам і генної інженерії.

Отримано перші обнадійливі результати в створенні аллерговакцин з використанням специфічних алерген-детермінантних груп в комплексі з иммуностимулятором. Шляхи удосконалення ЗВТ можуть визначатися поєднанням розробок у створенні сучасних типів лікувальних препаратів: в тому числі на основі рекомбінантних і синтетичних форм, аллерговакцин майбутнього, а також шляхом впровадження нових підходів до проведення СІТ (вибір оптимальних схем введення алергенів і ін.).

Більш детально характеристика, схеми введення та критерії обліку реакцій на введення алергенів представлені в розділі «Методи алерген-специфічної імунотерапії».

Хутуева С.X., Федосєєва В.М.