Доімплантаційна діагностика патології плода.

доімплантаційна діагностика (ДД) - новий напрямок в ВМД спадкових хвороб, що виникло в 90-х роках завдяки розвитку методів допоміжної репродукції (екстракорпорального запліднення), методів молекулярної цитогенетики (різні варіанти FISH) і молекулярної генетики (варіанти ПЛР), прийнятних для аналізу геному одиничних клітин. Якщо перші успішні спроби ДД були обмежені визначенням статі ембріона при Х-зчеплених захворюваннях, то в даний час спектр спадкових хвороб істотно збільшився і включає не тільки багато моногенні (муковісцидоз, фенілкетонурія), але і різні хромосомні хвороби. Згідно з останніми даними, до 2001 року в світі проведено близько 2500 ДД. Після відсіву хворих зародків і трансплантації в матку реципієнтів залишилися ембріонів в 500 випадках народилися здорові діти.

В Росії доімплантаційна діагностика робить тільки перші кроки і по суті зосереджена в декількох центрах допоміжних репродуктивних технологій в Москві і Санкт-Петербурзі, причому і в цих центрах вона обмежена діагностикою статі плода (планування сім`ї та Х-зчеплені захворювання), а також винятком хромосомнихаберацій.

Слід нагадати, що матеріалом для доімплантаційної діагностики є полярні тільця або окремі бластомери дробиться яйцеклітини, отримані мікрохірургічним шляхом від доімплантаційних зародків - продуктів екстракорпорального запліднення. Залежно від матеріалу ДД можна поділити на Преконцепційна (аналіз полярних тілець) і власне доімплантаційна (аналіз бластомерів або клітин трофобласта). Коротко розглянемо основні принципи ДД, можливості таких підходів, їх переваги та недоліки.

Діагностика з використанням полярних тілець дозволяє проводити відбір ооцитів, що не несуть генних і геномних мутацій, для запліднення. Отримано переконливі докази того, що видалення першого полярного тільця чи не порушує процесів дроблення і імплантації, а також не впливає на ембріональний розвиток. Полярні тільця частіше використовують для діагностики моногенних хвороб. Основна проблема - велика ймовірність неточного прогнозу про генотипі ооцита за результатами тестування тільки першого полярного тільця. Ймовірність влучення в ооцит другого порядку хромосоми, що несе мутацію в результатіКросинговер, теоретично становить 50%, тому точний діагноз про наявність певної мутації може бути поставлений тільки після закінчення другого поділу мейозу, тобто по другому полярному бичка, яке утворюється вже після запліднення яйцеклітини.

Відео: Пренатальна діагностика, ультразвукова діагностика патології плода

Друга проблема доімплантаційної діагностики обумовлена особливостями застосування молекулярно-генетичних методів для діагностики одиничної клітини. На результати дослідження можуть вплинути різні чинники, зокрема контамінація зразка або умови проведення ПЛР.

для подолання цих проблем розроблені методи послідовного аналізу 1 і 2 полярних тілець при молекулярної діагностики аутосомно-рецесивних захворювань. Досягнуті успіхи і в розробці оптимальних умов для проведення ПЛР на одиничних клітинах, які сприяють зниженню ймовірності помилкового діагнозу. Ці підходи дозволяють успішно застосовувати ДД у випадках Х-зчеплених, аутосомно-Домінал-тних і рецесивних захворювань.

Відео: Фрагменти семінару з пренатальної діагностики. патологія шлунково-кишкового тракту

Проблема цитогенетичного аналізу полярних тілець полягає в неможливості застосування традиційних методів дослідження метафазних хромосом. Більшість робіт виконано FISH-методом з використанням суміші ДНК-зондів, специфічних до пріцентромерних ділянках окремих хромосом.

В останні роки розроблено та апробовано методи приготування хромосом з полярних тілець людини, придатні для стандартного цитогенетичного аналізу. Запропоновані модифікації вже дозволили провести хромосомний аналіз перших полярних тілець з ефективністю 94,1%. Стали доступними для стандартного аналізу і хромосоми другого полярного тільця після його ін`єкції в цитоплазму енуклеірованних ооцита. Однак подолання методичних труднощів не вирішує проблему точності цітогенетіческоі діагностики по полярним тільцям. Так, аналіз першого полярного тільця дозволяє реєструвати Анеуплоїдія, що виникла внаслідок аномальної сегрегації хромосом лише в першому поділі мейозу, в той час як частота анеуплоїдних друге полярних тілець становить близько 25%. Більш того, виявлена висока ступінь дискордантности хромосомних наборів у другому полярному тільце і в материнському пронуклеусом у мишей. Ці обставини, зумовлені аномальної сегрегацією хроматид в анафазе II, ставлять під сумнів коректність діагностики на основі аналізу хромосом полярних тілець. Таким чином, можливості для преконцепційної діагностики спадкових хвороб вже реально існують. Разом з тим використання полярних тілець для молекулярно-генетичного і цитогенетичного аналізу поки ще не стало популярним серед фахівців ДД. Складнощі методичних прийомів роботи з одиничними клітинами і велика ймовірність діагностичних помилок не виправдовують значних фінансових витрат на проведення преконцепційної діагностики.