Попередімплантаційна генетична діагностика (пгд). Показання і можливості

Для пар, у яких вже були діти, загиблі від вродженої генетичної аномалії, або які були змушені перервати патологічно протікає вагітність, можливість пренатальної діагностики і переривання вагітності не буває настільки вже привабливою. Ці пари, безумовно, вважали за краще б альтернативні методи. Попередімплантаційна генетична діагностика (ПГД) - різновид пренатальної діагностики, здійснюваної ще до настання вагітності як такої, котра поєднує штучне запліднення з біопсією ембріона, яка дозволяє діагностувати порушення ще до підсадки ембріона. ПГД застосовують в спеціалізованих клініках вже більше 15 років. Сьогодні цю технологію використовують для профілактики і лікування трьох груп генетичних аномалій.

Відео: Попередімплантаційна генетична діагностика. ПГД (PGD)

По-перше, її використовують для профілактики моногенних аутосомно-рецесивних синдромів, коли батьки бувають носіями, а ризик рецидиву складає 25%. Кістозний фіброз був першим патологічним станом, діагностованим за допомогою ПГД. Для осіб, уражених аутосомно-домінантними захворюваннями, ризик рецидиву складає 50%. Прикладами аутосомно-домінантних синдромів, діагностованих за допомогою ПГД, служать синдром Марфана і хвороба Хантінгтона. Для проведення ПГД необхідний аналіз ДНК окремих клітин, тому основним застосовуваним методом став метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). У більшості випадків використовують методики гніздову мультиплексной і флюоресцентної мультиплексной ПЛР.

Попередімплантаційна генетична діагностика (ПГД) також використовують для профілактики звичного невиношування вагітності при наявності у одного з партнерів реципрокною транслокации або робертсоновской транслокации. Для лікування пар, в яких є носій таких транслокацій, використовують дві технології. У жінок - носіїв транслокації виробляють біопсію першого полярного тільця незабаром після отримання яйцеклітини, ще до запліднення, з наступним повним хромосомним аналізом методом FISH. Через те, що описану методику можна застосувати лише до жінок - носії транслокаций, частіше використовують метод біопсії ембріона.

для діагностики робертсонівських транслокаций необхідно два FISH-зонда, розташованих на теломерна кінцях зацікавлених хромосом. Для діагностики реципрокних транслокацій необхідно три зонда, мічених різними інформаційними флюорохромами: два з них повинні знаходитися в центромерних регіонах кожної хромосоми, а залишився - на Теломерная кінці хромосоми. При цьому можна розрізнити ембріони з незбалансованим хромосомним набором і ембріони зі збалансованим набором, як нормальні, так і є збалансованими носіями. На жаль, як показали дослідження, ембріони від носіїв транслокацій характеризуються високою частотою хромосомних аномалій, а вагітність у таких пар виникає рідко.

Вже давно відома зв`язок віку матері з частотою хромосомних аномалій. Також встановлено, що в 60% випадків спорадичних викиднів причиною бувають хромосомні аномалії плода. У світлі цього не дивно, що ПГД використовують в поєднанні зі штучним заплідненням для пар з підвищеним ризиком анеуплоїдії через вік матері. Частота успішних результатів штучного запліднення підвищується при використанні ПГД і скринінгу на Анеуплоїдія у жінок у віці від 35 до 40 років. Скринінг на Анеуплоїдія в даний час буває найчастішим показанням до ПГД.

для стимуляції яєчників і отримання яйцеклітини використовують стандартні протоколи штучного запліднення. Ооцити запліднюють in vitro або методом ІЦІС, ембріон вирощують до 6 або 8-клітинної стадії. Потім ембріон утримують в культуральному середовищі за допомогою піпетки, БО розкривають розчином кислоти або лазерним променем і вводять Біопсійний піпетку для аспірації одного-двох бластомерів з метою генетичного аналізу. Перевага біопсії ембріона - можливість дослідження більш ніж однієї клітини. Альтернативою ембріональної біопсії виступає біопсія полярного тільця ооцита для з`ясування статусу носія. Група дослідників з Чикаго розробила цю технологію і показала її ефективність в діагностиці моногенних захворювань.

при частоті безпліддя 1:10 на даний час 3% всіх пологів в деяких західних країнах здійснюються за допомогою ДРТ. Незважаючи на те що ДРТ вважають безпечними, всі діти, зачаті з їх допомогою, внесені до спеціального реєстру, і за ними здійснюють постійне спостереження. Можливий зв`язок між ДРТ і розвитком синдрому Беквита-Відеманн до теперішнього часу зафіксована в трьох регістрах по всьому світу. Цей синдром обумовлений дефектом, локалізованим на 11р15, і характеризується гіпертрофією органів, макроглосія і дефектами черевної стінки. Дослідження показали чотириразове зростання ризику розвитку синдрому Беквита-Відеманн при використанні ДРТ. Також в літературі є повідомлення про зв`язок ДРТ і синдрому Енжелмана. Обидва цих синдрому пов`язані з импринтингом суміжних генних кластерів.

Близько 10% спорадичних випадків синдрому Енжелмана і 50% випадків синдрому Беквита-Відеманн обумовлені епігенетичними дефектами імпринтингу. У всіх випадках синдрому Енжелмана і в 13 з 19 випадків синдрому Беквита-Відеманн спостерігали відсутність метилування материнського алеля відповідного гена. Цей факт привів до припущення, що «відбився» гени ризикують втратити метилування в Попередімплантаційна період і що причиною цього можуть виявитися ДРТ як за рахунок ІЦІС, так і за рахунок культуральної середовища in vitro. Таким чином, ці роботи обумовлюють необхідність проведення тривалих досліджень дітей, зачатих за допомогою ДРТ, і довгострокового спостереження за їх розвитком.

Основні передумови для генетичної діагностики в гінекології і акушерства:
• З початком роботи Проекту «Геном людини» ми отримали можливість діагностувати, а в деяких випадках і лікувати спадкові хвороби ще до їх маніфестації.

• Проект «Геном людини» привів до відкриття нових складних аспектів структури та експресії генів. Клініцисти повинні знати про те, яким чином нові технології дозволяють ідентифікувати генні мутації і оцінити їх вплив на стан здоров`я людини.

• Імпрінтінг, однородітельская дисомія, мітохон-дріальное успадкування і аномалії трінуклеотідамі-них повторів вважають нетрадиційними формами спадкування, здатними передавати спадкові захворювання людини.
• Гени SRY, SOX9, SF1, WT1 і DAX - найважливіші гени, необхідні для диференціювання статевих залоз.

• Найважливішими генами для реалізації нормального фертильного чоловічого фенотипу служать ген АР, локалізований на довгому плечі Х-хромосоми, ген SRY, локалізований на короткому плечі Y-хромосоми (він визначає розвиток яєчок), і гени AZF (відповідають за сперматогенез).

• Синдром Клайнфелтера (XXY) - найбільш часта генетична причина необструктивной азооспермії.
• мікроделецій регіонів AZF стають причиною 10-20% всіх випадків азооспермії і 3-10% випадків вираженої олігоспермія. Ці мікроделеції передаються по всім представникам чоловічої лінії в родині.

Відео: ПГД - Передімплантаційна генетична діагностика

• Попередімплантаційна генетична діагностика (ПГД) використовують для діагностики моногенних і хромосомних хвороб ще до настання вагітності, проте існують побоювання, що з ПГД пов`язано підвищення частоти вроджених захворювань, асоційованих з импринтингом.