Лімфокін-активовані кілери для імунізації. Вплив лімфокін-активованих кілерів на вроджений імунітет

IL-2 або його екзогенні аналоги стимулюють проліферацію природних кілерів і підсилюють їх цитолитические функції, приводячи до утворення так званих лімфокін-активованих кілерів (ЛАК). За своєю природою ЛАК є цитотоксичними лімфоцитами, які здатні знищувати клітини, заражені вірусами або внутрішньоклітинними бактеріями і пухлинні клітини. В даний час можливості ЛАК-терапії досліджуються при різних формах онкологічних захворювань. При інфекційних захворюваннях метод адоптивного перенесення ЛАК практично не вивчався.
цей питання був нами вивчений при зараженні мишей лінії СВА культурою штаму К. pneumoniae K2.

Лімфокін-активовані кілери отримували з МЛ селезінки мишей при культивуванні протягом двох діб в середовищі RPMI-1640 містить 1000 МО / мл IL-2, потім клітини відмивали і використовували в експерименті.
Морфогістохіміческіе дослідження виявили, що ЛАК представляють собою великі клітини лімфоїдного ряду типу імунобластів і пролімфоцітов з базофільною цитоплазмою. В мазках часто виявляються клітини в стані мітотичного поділу. При фазово-контрастної мікроскопії ЛАК представляють пролиферирующие конгломерати клітин.

Таким чином, при впливі IL-2 на МЛ кіс мишей відбувалася генерація ЛАК, що характеризується проліферацією і активацією клітин лімфоїдного ряду. Підвищена експресія активації-ційних антигенів, що формує особливості імунофенотипу ЛАК, також свідчила про процеси активації лімфоцитів. Крім того, нами було виявлено, що ЛАК володіли достовірно вищою киллерной активністю в порівнянні з інтактними МЛ по відношенню до NK-чутливої лінії клітин мишачої лімфоми YAC-1.

За думкою, NK - Основна субпопуляція лімфоцитів, що експресують р75р ланцюг рецептора IL-2 і селективно активується і проліферуюча під його впливом з утворенням ЛАК, здатних ефективно лизировать пухлинні клітини-мішені. Однак поряд з викладеними уявленнями, є дані про існування в популяції ЛАК NKT-клітин, що експресують не тільки маркери NK (CD16, CD56), але і Т-клітинні диференціювальні антигени (CD3, CD4, CD8).

Ці дані відповідають висловленим раніше припущеннями про NK-клітинах, які розглядалися не тільки як самостійна субпопуляція, але і як етап диференціювання зрілих лімфоцитів. З зрілих лімфоцитів при інкубації з IL-2 можуть бути отримані так звані NK-ЛАК-клітини.

В наших експериментах після культивування МЛ селезінки мишей з IL-2, були отримані ЛАК, експресують на своїй мембрані активаційні молекули (CD25) і молекули головного комплексу гісто-сумісності МНС I, МНС II. У той же час, в популяції ЛАК, крім NK, присутні клітини, які експресують і Т-клітинні диференціювальні антигени (CD3, CD4, CD8).

Останні в таких же кількостях були виявлені в вихідної популяції МЛ. використана технологія отримання лімфокін-активованих кілерів забезпечила істотне збільшення NK-клітин з 1,5 до 20,3%, а також клітин, що містять маркер CD25 і молекул антигенного уявлення МНС I і II.

отриману суспензію лімфокін-активованих кілерів вводили мишам внутрішньоочеревинно по 2,5 х 106 клітин в 0,5 мл 0,9% розчину натрію хлориду. Потім, внутрибрюшинно вводили по 250 клітин в обсязі 0,5 мл До pneumoniae K2. В якості контролю були використані МЛ, культивувалися в присутності ФГА (10 мкг / мл).

Лімфокін-активовані кілери у інфікованих К. pneumoniae (100 LD50) мишей забезпечували 100% виживання тварин при практично одночасному введенні кілерних і мікробних клітин. МЛ, активовані ФГА, захищали в 50% випадків при 100% загибелі інтактних мишей, які отримали ту ж заражає дозу.
Наші дослідження підтверджують доцільність досліджень по використанню ЛАК для адоптівная імунотерапії, оскільки введені мишам внутрішньоочеревинно ЛАК запобігали розвиток захворювання К.pneumoniae K2 у тварин.

при визначенні цитокінів в культуральному середовищі ЛАК виявлялося підвищений вміст IL-1 через 24 год і 72 год інкубації (254 + 12,3 пг / мл і 213 ± 11,5 пг / мл, відповідно), через 72 год - IL-6 (224 ± 21 , 2 пг / мл) і IL-10 (150 ± 10,5 пг / мл) у порівнянні з культурою мЛ (зміст цих цитокінів в контролі не перевищувало 25-80 пг / мл), інкубованих без IL-2. Цікаво відзначити, що в культуральному середовищі лак не збільшувався вміст регуляторного IL-12, що ми в значних кількостях визначали в культуральному середовищі ДК.

цитотоксичну активність лімфокін-активованих кілерів, отриманих з селезінки мишей (СВА), визначали на NK-залежною лінії клітин мишачої лімфоми YAC-1 в тесті відновлення 3- (4,5-діметілтіазол-2-іл) -2,5-діфенілтетразолія броміду (МТТ-тест). Пухлинні клітини (1 х 104 в 1 мл) інкубували в культуральному середовищі з ЛАК в різних співвідношеннях і по оптичної щільності при довжині хвилі 540 нм, розраховували відсоток лізису пухлинних клітин (відсоток цитотоксичності).
Оцінка киллерной активності ефекторних клітин показала, що ЛАК мають достовірно більшою NK-активністю в порівнянні з МЛ інтактних мишей.

При співвідношенні 1: 5 ЛАК і пухлинних клітин мишачої лімфоми YAC-1 цитотоксическая активність кілерів збільшувалася в 6 разів у порівнянні з МЛ. У даних умовах МЛ ціалізуватися 15,5% клітин лінії К562, в той час як в аналогічних умовах ЛАК викликали загибель 92,2% пухлинних клітин (р lt; 0,01). У менших співвідношеннях мішені / Ефектори (1: 2 і 1: 1) ці відмінності не такі значущі, хоча цитотоксическая активність ЛАК перевищує таку у МЛ інтактних мишей.