Дія імуномодуляторів на активацію дендритних клітин. Дозрівання дендритних клітин

Важливим етапом цих досліджень було вивчення впливу імуномодуляторів мікробного походження на процеси дозрівання ДК, отриманих з мононуклеарних лейкоцитів периферичної крові (МЛПК) донорів.
дендритні клітини отримували з МЛПК здорових донорів. Як індукторів дозрівання використовували імуномодулятори мікробного походження - Іммуновак-ВП-4 (25 мкг / мл), ГМДП (10-25 мкг / мл), АСО (0,3 ЄС / мл). Контролем служили ДК, культивовані в присутності TNF-a (20 нг / мл).

При інкубування дендритних клітин, отриманих з МЛПК здорових донорів, в присутності ІММП відзначали посилення експресії костімулірующей молекули CD80, маркера термінальної диференціювання CD83 (Іммуновак-ВП-4, ГМДП і TNF-a), молекули антигенного уявлення HLA-DR. Молекула CD14 на клітинах, стимульованих Іммуновак-ВП-4, ГМДП і TNF-a, експресуватися менш активно, ніж при дії АСО. Іммуновак-ВП-4 посилював експресію молекули CD80 в 3,2, 3,8 і 2,6 рази більше, ніж TNF-a, ГМДП і АСО, відповідно.

При культивуванні дендритних клітин в присутності АСО відсоток клітин, що експресують CD83, був невисокий - 1,5 ± 0,8, тоді як висока експресія цього маркера відзначалася при культивуванні ДК з TNF-a, Іммуновак-ВП-4 і ГМДП. На ДК, стимульованих Іммуновак-ВП-4 і TNF-a, експресія молекул CD1a була вище в 1,7 рази і в 1,4 рази відповідно в порівнянні з АСО.

Кількість клітин, що експресують молекулу антигенного уявлення HLA-DR, також було більше при використанні Іммуновак-ВП-4 і TNF-a.
молекула CD14 максимально була представлена на поверхні незрілих клітин, при стимуляції імуномодуляторами експресія її знижувалася, проте при культивуванні ДК з АСО число клітин, що експресують антиген CD14 було нижче, ніж при дії інших імуномодуляторів, а маркер термінальної диференціювання ДК в цій культурі практично не визначався, що може свідчити про присутність в культурі пулу макрофагів і незрілих клітин.

два інших імуномодулятора - Іммуновак-ВП-4 і ГМДП стимулювали дозрівання ДК більшою мірою. Про це в першу чергу свідчать наявність молекули CD83 на поверхні ДК і невеликий відсоток клітин, що експресують маркер CD14, що дозволяє припустити при цьому формування певного пулу макрофагів або незрілих ДК. Однак при фарбуванні подвійний міткою виявлено, що частина (14,2%) ДК одночасно експресують молекули CD14 і CD83.

Як відомо, маркер CD83 не присутній на макрофагах і незрілих ДК, отже, можна вважати, що під впливом, зокрема Іммуновак-ВП-4, формувалися зрілі ДК, що володіють химерними молекулярними структурами.

Для зрілих дендритних клітин характерно збільшення експресії молекул, що беруть участь в презентації антигену. Костімулірующая молекула CD80 слабо представлена на незрілих ДК. При додаванні імуномодуляторів посилювалася експресія цього маркера, причому Іммуновак-ВП-4 максимально стимулював його поява на поверхні клітин в порівнянні з іншими імуномодуляторами, а також з TNF-a.

В процесі дозрівання дендритних клітин відзначається посилення експресії HLA-DR, що дає можливість клітині експресувати на поверхні пептиди, отримані під час процесинга мікроорганізму. Однак на поверхні АПК можуть виявитися і власні білки. В якості контрольного механізму, що запобігає розвиток аутореактівние, виступають костімулірующіе молекули (CD40, CD80, CD86), експресія яких істотно зростає після взаємодії саме з бактеріальними паттернами.

Дендритні клітини, що представляють на своїй поверхні аутореактівние білки, у відсутності костімулірующіх молекул провокують анергію аутореактівних клонів Т-клітин. В процесі дозрівання ДК немає необхідності в подальшому поглинанні мікроорганізмів, що призводить до зниження молекул, які опосередковують фагоцитоз: маннозного рецептора, CD14, CD64, CD11b (рецептор до компоненту комплементу).

Таким чином, обробка дендритних клітин, отриманих з МЛПК здорових донорів, імуномодуляторами бактеріального походження - Іммуновак-ВП-4 і ГМДП викликала дозрівання клітин, при цьому відбувалося збільшення експресії костімулірующей молекули CD80, молекул антигенного уявлення CD1a, HLA-DR, а також з`являвся маркер термінальної диференціювання CD83 і знижувалася експресія CD14 .

При використанні АСО макрофагальний маркер кілька знижувався, але був вище в порівнянні з дією інших імуномодуляторів, і при цьому посилювалася експресія CD80, а маркер термінальної диференціювання ДК - CD83 практично не експресуватися, що дозволяє зробити висновок про формування пулу макрофагів і незрілих ДК під дією АСО.