Вплив імуномодуляторів на цитокіни. Продукція цитокінів спленоцитах після стимуляції

Найважливішу роль в міжклітинних взаємодіях на рівні вродженого імунітету, регуляції імунної диференціювання Т-лімфоцитів і визначенні напрямку розвитку імунних процесів грають цитокіни.
Дослідження динаміки продукції цитокінів в процесі вакцинації дозволяє на клітинно-молекулярному рівні визначити механізм дії препарату і можливість його раціонального застосування.

вивчення рівня цитокінів було проведено на мишах лінії СВА, яких вакцинували Іммуновак-ВП-4 одноразово внутрішньоочеревинно в дозі 400 мкг. Цитокіни визначали за допомогою твердофазного імуноферментного методу (ELISA) в сироватці крові мишей і культурі спленоцитів в різні періоди часу після вакцинації, а також без добавок (спонтанна індукція). При спонтанної продукції в культуральному середовищі в різні інтервали часу після імунізації визначали підвищення вмісту наступних цитокінів: IL-1P, IL-6, IL-10, IL-12, INF-y. Звертає на себе увагу те, що зміна рівня цитокінів відбувається вже через 0,5-1 годину після вакцинації. При спонтанної індукції цитокінів спленоцитах збільшувався вміст прозапальних інтерлейкінів: IL-1B і IL-6, регуляторних IL-12 і IFN-y, найбільш високі рівні концентрацій яких відзначені протягом перших чотирьох годин.

при коінкубаціі спленоцитів тварин з Іммуновак-ВП-4 або ФГА виявлено зниження рівня продукції IFN-y, IL-10, підвищення IL-1 (3, IL-12 і збереження високих концентрацій IL-12 протягом більш тривалого часу, в порівнянні зі спонтанною продукцією цих цитокінів спленоцитах вакцинованих мишей.

ці експерименти показали, що введення ВП-4 викликає значне збільшення спектру цитокінів, яке визначається як в сироватці крові, так і в культурах спленоцитів вакцинованих мишей, що сприяє розвитку імунної відповіді і диференціювання Т-лімфоцитів по Th1-типу. Про це ж свідчить і те, що протягом усього часу спостереження не виявлено збільшення вмісту IL-4, що є медіатором диференціювання Т-лімфоцитів по Тh2 типу.

Продукція цитокінів спленоцитах після стимуляції

вивчення спектра і рівня цитокінів було проведено також у сироватці крові мишей, вакцинованих різними дозами АСО.
Введення мишам 15- 1,5- 0,15 одиниць зв`язування (ЄС) анатоксину приводило до збільшення в сироватках мишей змісту цитокінів IL-1B і IL-12 в порівнянні з їх рівнем до імунізації. Однак концентрації цих цитокінів були не такі високі (lt; 70 пкг / мл), як при введенні ВП-4.

рівень цитокінів в сироватці не мав істотних відмінностей при імунізації мишей зазначеними дозами АСО.
Далі була вивчена продукція цитокінів клітинами селезінки у мишей лінії СВА в культурі спленоцитах (2 х106 кл / мл) інкубували в культуральному середовищі протягом 48 годин при додаванні АСО (0,15 ЄС / мл) або ФГА (10 мкг / мл), а також без добавок ( спонтанна індукція).

при спонтанної індукції відзначали істотне збільшення вмісту в культурі спленоцитів IL-1b, IL-6, IL-10, причому IL-6 і IL-10 збільшувалися в більшій мірі при введенні меншої дози АСО. Суттєвою динаміки IL-12 і IFN-y не було відзначено. У культуральному середовищі при стимуляції спленоцитів ФГА визначали більш високий вміст IL-10 і поява значних кількостей IL-ip, IL-4, IL-2, TNF-a та IFN-y.

IL-2 при стимуляції спленоцитів ФГА підвищувався при імунізації мишей АСО дозами 15-0,15 ЄС / миша в 1,3-1,8 рази. Рівень IL-4 збільшувався практично при всіх використовуваних дозах анатоксину в культурі спленоцитів, стимульованих ФГА.

При внесенні в культуру спленоцитів мишей, імунізованих АСО, замість ФГА ex vivo АСО виявлено переважне підвищення рівня IL-10, зниження рівня IL-4, INF-y і відсутність динаміки IL-12.
отримані результати дозволяють припустити, що анатоксин ініціює Th1- і ТЬ2-шляху імунної відповіді, оскільки продуцентами IL-4 є ТП2-лімфоцити, а IL-12 поляризує імунну відповідь по ТР1 шляху.

спленоцитах імунізованих Іммуновак-ВП-4 і АСО мишей мають здатність до спонтанного синтезу широкого спектру цитокінів і подальша стимуляція спленоцитів ФГА або однойменними імуномодуляторами призводить до зниження IFN-y і IL-10 при дії Іммуновак-ВП-4, IFN-y і IL-4 при дії АСО.