Імунізація від інфекції дендритними клітинами. Ефективність активації вродженого імунітету

Далі була вивчена здатність сінгенних дендритних клітин індукувати специфічний захист від інфекції на моделі К. pneumoniae К2. ДК отримували з кісткового мозку мишей методом, описаним вище На 7-му добу в культуру ДК вносили лизат К. pneumoniae K2 (50 мкл / мл) і 20 нг / мл TNF-a. На 9-ту добу ДК відмивали і ними імунізували мишей лінії СВА.

мишей імунізували в різних дослідах 4, 3 і 2-кратно з інтервалом в 2 тижні. У 1-му досвіді ДК вводили підшкірно по 2,5-3,0х106 клітин в 0,5 мл, у 2-му досвіді і далі - така ж кількість клітин вводили 3-кратно підшкірно або внутрішньочеревно. Імуногенну активність дендритних клітин, пульсувати лізатів К. pneumoniae К2, визначали при внутрибрюшинном зараженні мишей вірулентним штамом К. pneumoniae K2 в дозі 100 мікробних клітин в обсязі 0,5 мл 0,9% розчину натрію хлориду. Заражали мишей через 14 діб після останньої вакцинації ДК Досвід супроводжували контролем заражающей дози на невакцинованих мишах. Спостереження за тваринами проводили протягом 10 діб (загибель мишей припинялася на 7-у добу після зараження).

зрілі ДК, пульсувати лізатів К.pneumoniae, при такому режимі імунізації мишей і зараженні через 14 діб попереджали загибель від летальної дози гомологичной інфекції в 83,3-100% випадків при 100% загибелі контрольних тварин, в той час як незрілі ДК при такій же постановці експерименту не володіли протективной активністю Отримані дані свідчать про можливість формування адаптивного (специфічного) імунної відповіді під впливом ДК, оброблених гомологічним антигеном.

У наступних експериментах по вивченню специфічного проти-воінфекціонного ефекту дендритних клітин, що дозріли під впливом різних антигенів: лизата К. pneumoniae K2 (50 мкл / мл), TNF-a (20 нг / мл) і Іммуновак-ВП-4 (25 мкг / мл) схема імунізації ДК була скорочена до двох введень і через 14 діб заражали мишей К.pneumoniae K2 в дозі 25-50 мікробних клітин.

зрілі ДК, навантажені лізатів К.pneumoniae К2 (з TNF-a та без TNF-a), при дворазової імунізації забезпечували захист мишей в 100% випадків, проти 20% тих, що вижили мишей в контролі. У той час як ДК, дозрілі під впливом тільки TNF-a, не захищали мишей від летальної дози інфекції, а ДК, дозрілі під дією Іммуновак-ВП-4, надавали протектівниі ефект в 33,3% випадків. У цьому досвіді отримані також дані про те, що тільки ДК, навантажені гомологічним антигеном, мали значну протектівниі ефектом, виявленим нами через 14 діб після імунізації. Це свідчить про здатність пред`явлення ДК антигенів Т-лімфоцитів, які диференціюються в специфічні клітини-ефектори.

Резюмуючи вищевикладене, слід зазначити, що антігенпредставляющіе функція ДК встановлена також на модельних інфекціях мишей. Специфічна протективная активність відносно К. pneumoniae K2, тестована через 14 діб після 2-4 кратного введення ДК, формується тільки ДК, навантаженими гомологічним антигеном. Зрілі ДК при використанні в якості індуктора дозрівання Іммуновак-ВП-4, але не навантажені антигеном, забезпечують в цей термін слабкий захист, що, ймовірно, пов`язано з наявністю перехресно реагуючих антигенів у складі антигенних компонентів Іммуновак ВП-4.

Активація вродженого імунітету і можливість створення захисту від невідомого патогена показана при одночасному введенні мишам зрілих і незрілих ДК, і в якості невідомого патогена К. pneumoniae K2.

Отримано експериментальні факти, підтверджують гіпотезу, згідно з якою активація вродженого імунітету імуномодуляторами бактеріального походження, які є агоністами TLRs, веде до швидкого розвитку резистентності до гетерологічним патогенів. При зараженні S typhimurium одноразово імунізованих Іммуновак-ВП-4 мишей виявлено значуще збільшення тривалості життя в порівнянні з інтактними тваринами.

дослідження цитокинового профілю у вакцинованих Іммуновак-ВП-4 мишей виявило вже через 0,5 години після введення ВП-4 збільшення експресії IL-10, IL-6, через 4 години збільшення продукції IL-12, IFN-y. При зараженні таких мишей S. typhimurium відзначається повна резистентність протягом чотирьох діб (при загибелі до цього часу 85% інтактних мишей) і слабка при цьому експресія цитокінів.