Антигенпрезентуючими функція дендритних клітин під дією імуномодуляторів. Вплив імуномодуляторів на лімфоцити

заключним етапом функції дендритних клітин в рамках вродженого імунітету є уявлення антигену і визначення спрямованості T-клітинної імунної відповіді. Тому були проведені експерименти по вивченню дії ІММП на антігенпредставляющіе функцію ДК і на їх здатність представляти антиген наївним Т-лімфоцитам.

Зокрема була вивчена здатність дендритних клітин, сформувалися під впливом ІММП, стимулювати проліферацію сінгенних лімфоцитів мишей лінії СВА. Для цього МЛ селезінки мишей (106 клітин) коінкубіровалі протягом 6 діб з ДК (5 х 104), отриманими з клітин кісткового мозку, під впливом ІММП. Як референс-препаратів використовували ЛПС К. pneumoniae і TNF-u.

оцінку проліферативної активності МЛ, стимульованих дендритними клітинами, проводили в колориметрическом тесті з використанням вітального барвника AlamarBlue (Biosours, США). Розраховували індекс стимуляції, що характеризує відношення проліферативної активності МЛ при стимуляції зрілими ДК, до проліферативної активності МЛ при стимуляції незрілими ДК.

Сформовані під впливом ІММП, зрілі дендритні клітини стимулювали проліферативну активність мононуклеарних лейкоцитів мишей. Активність цих клітин була порівнянною з активністю ДК, дозрілих після взаємодії з ЛПС або TNF-a, за винятком ДК, стимульованих АСО. В даному випадку проліферація лімфоцитів була нижче в порівнянні з іншими індукторами дозрівання ДК, але вище в порівнянні з незрілими ДК. Це, можливо, було пов`язано з формуванням пулу макрофагів, які поступаються активності зрілих ДК. При цьому індекс стимуляції склав 1,4, у всіх інших випадках індекс стимуляції був в межах 2-2,3.

У наступних експериментах вивчали антігенпредставляющіе функцію дендритних клітин, отриманих з клітин кісткового мозку мишей, що сформувалися під впливом ІММП Здатність ДК представляти антиген Т-лімфоцитам оцінювали по зміні цитотоксичної активності лімфоцитів при культивуванні їх в присутності ДК.

Для цього незрілі дендритні клітини навантажували лізатів різних пухлинних клітин і інкубували з імуномодуляторами протягом 16 годин. Потім ДК відмивали і інкубували з лімфоцитами сінгенних мишей в співвідношенні 1:20 протягом 6 діб в середовищі RPMI-1640. Контролем служили ДК, не оброблені лізатів пухлинних клітин. Далі відмиті лімфоцити коінкубіровалі з культурою досліджуваних пухлинних ліній в співвідношенні 5: 1 протягом 24 годин.

потім оцінювали цитотоксичность лімфоцитів на лініях пухлинних клітин мишачої лімфоми YAC-1, Ерліха, L929, До 562 в тесті відновлення 3- (4,5-діметілтіазол-2-іл) -2,5-діфенілтетразолія броміду (МТТ-тест). На першому етапі визначали здатність ДК презентировать антиген під впливом Іммуновак-ВП-4, контролем служили ДК, оброблені TNF-a.

цитотоксичність лімфоцитів щодо випробуваних пухлинних ліній коливалася в межах 33,9-43,9%, додаток незрілих ДК не приводило до значущого збільшення цього показника. ДК, дозрілі вод впливом вакцини ВП-4, мали здатність пред`являти антиген наївним Т-лімфоцитам, що призводило до формування цитотоксичних ефекторів, які є елементом специфічного адаптивного імунітету.

Дійсно, після контакту in vitro Т-лімфоцитів з дозрілими під впливом різних індукторів дендритних клітин, які були навантажені антигенами досліджуваних перевіваемих ліній пухлинних клітин, Т-лімфоцити набували здатність лизировать гомологічні для пред`явленого антигену клітини-мішені. ДК, активовані Іммуновак-ВП-4 і навантажені пухлинними антигенами, забезпечували в гомологичной системі збільшення цито-токсичності до 83,5-79,3%. ДК, активовані TNF-a та навантажені пухлинними антигенами, в гомологичной системі забезпечили таку ж ступінь цитотоксичності 89,1-72,5%. У той же час щодо інших пухлинних клітин, антигенами яких ДК були оброблені, цито-токсична активність була нижчою і коливалася в межах 59,3-37,5% при активації Іммуновак-ВП-4 і 59,3-40,1 % при TNF-a.