Цитотоксичність природних кілерів. Вплив імуномодуляторів на nk-клітини

При зменшенні вмісту мононуклеарних лейкоцитів периферичної крові (МЛПК) цитотоксическая активність прогресивно знижувалася навіть при використанні максимальної з випробуваних доз препаратів. При розведенні МЛПК (1: 1) достовірної стимулюючої активністю у всьому діапазоні випробуваних доз володів ФГА, бактеріальна вакцина в дозах 10,0 і 1,0 мкг / мл, а ЛПС ефективніше виявився тільки в дозі 10 мкг / мл. Ці дані свідчать про відсутність прямого цитотоксичної дії препаратів на клітини-мішені і підтверджують їх здатність стимулювати цитотоксичний ефект МЛПК. Найменшою цитотоксичною активністю володіли МЛПК, стимульовані В-клітинними митогенами - бактеріальними ЛПС. При цьому активність використаних ЛПС не мала відмінностей.

У порівнянні з ЛПС Іммуновак-ВП-4, що містить в своєму складі не тільки ЛПС, а й інші активні антигенні компоненти мікробних клітин, більшою мірою стимулював цитотоксичну активність МЛПК при всіх дозах і різних співвідношеннях пухлинних клітин і ефекторів.

Ці дані повністю підтвердилися при дослідженні здатності тих же препаратів індукувати NK-активність МЛПК щодо чутливої до дії природних кілерів клітин пухлинної лінії К562. На підставі попередніх досліджень було вибрано найбільш ефективне співвідношення клітини-мішені / клітини ефектори (1: 5). При цьому спостерігали дозозалежний ефект Іммуновак-ВП-4, ФГА і ЛПС на цитотоксичність МЛПК.

Доза, не надає істотного стимулюючого впливу на цитотоксичну активність МЛПК, для всіх препаратів становила 0,01 мкг / мл. Проведене дослідження показало перевагу Іммуновак-ВП-4 у порівнянні з ФГА, ЛПС К. pneumoniae і E. coli в діапазоні доз від 10,0 до 1,0 мкг / мл.

Порівняльний аналіз показав, що МЛПК донорів, стимульовані IL-2 (1000 МО / мл) і Іммуновак-ВП-4 (10 мкг / мл), практично в рівній мірі мають виражену цитотоксичну дію по відношенню до лінії пухлинних клітин ерітробластного лейкозу (К562) і хіміорезистентної лінії недрібноклітинного раку легені людини ( А549), при цьому цитотоксичну дію активованих МЛПК по відношенню до нормальних ембріональних клітин легкого теляти (ЛЕК) відсутнє. Це свідчить про вибіркове опосередкованому дії IL-2 і Іммуновак-ВП-4 (через МЛПК) щодо трансформованих і нормальних клітин.

аналогічне дослідження було проведено при порівняльному вивченні впливу АСО, ГМДП і Іммуновак-ВП-4 на цитотоксичну активність МЛПК здорових донорів по відношенню до клітин-мішеней К562.

при випробуванні впливу ІММП на цитотоксичну активність МЛПК по відношенню до лінії ерітробластного лейкозу людини К562 лімфоїдні клітини відмивали від містяться в культуральному середовищі ІММП, що виключало їх пряме цитотоксичну дію на пухлинні клітини. Все ІММП викликали посилення цитотоксичної активності, при цьому, як і в попередніх дослідженнях, зі зниженням кількості ефекторів, знижувалася і кілерних активність МЛПК. Цитотоксическая активність МЛПК при дії Іммуновак-ВП-4 виявилася вищою, ніж при дії АСО при співвідношенні мішені / Ефектори 1: 5 і 1:10. При зменшенні кількості ефекторів цитотоксичность МЛПК при впливі імуномодуляторів знижувалася, але при цьому її рівень був значно вище, ніж в контролі.
Оцінка цитотоксического індексу МЛПК показала, що при співвідношенні мішені / Ефектори 1: 5 і 1:10, цитотоксичний індекс вище при дії Іммуновак-ВП-4 і ГМДП на МЛПК, ніж при дії АСО.

Була також оцінена цитотоксическая активність мононуклеарних лейкоцитів (МЛ) селезінки мишей лінії СВА після одноразової імунізації АСО (1,5 ЄС), Іммуновак-ВП-4 (200 мкг) і ГМДП (100 мкг) по відношенню до клітин NK-чутливої мишачої лімфоми YAC-1.

Дані свідчать про те, що всі досліджувані імуномодулятори мікробного походження (ІММП) викликали посилення цитотоксичної активності МЛ селезінки мишей після їх імунізації в порівнянні з неімунізованих мишами. ГМДП і Іммуновак-ВП-4 в даній серії експериментів були більш активними, оскільки цитотоксический індекс, що показує відношення цитотоксичности МЛ імунізованих мишей до цитотоксичної активності в контрольній групі тварин, підвищувався до 4,5 при імунізації Іммуновак-ВП-4 і до 4,7 - при введенні ГМДП. АСО підвищував даний показник до 3,7.

Оцінка проліферативного потенціалу мононуклеарних лейкоцитів периферичної крові людини показала, що Іммуновак-ВП-4, так само як і референс-препарати: ФГА, ЛПС К. pneumoniae і Е. coli викликали дозозалежне збільшення кількості владних форм в популяції МЛ. При цьому активність Іммуновак-ВП-4 у всіх досліджуваних концентраціях була вище досліджених ЛПС і порівнянна з дією ФГА Порівняльний аналіз проліферативної активності лімфоцитів під впливом різних концентрацій ІММП (Іммуновак-ВП-4, ГМДП і АСО) виявив максимальний стимулюючий ефект у Іммуновак-ВП -4, а найменший у АСО.

Всі досліджені препарати посилювали цитотоксичну активність МЛПК по відношенню до пухлинних клітин колоректального раку (Colo) і NK-чутливої лінії К562. Аналогічна картина спостерігалася відносно цитотоксического потенціалу МЛ імунізованих мишей, дослідженими препаратами. Стимулююча активність АСО на цитотоксический потенціал NK поступалася дії ГМДП і Іммуновак-ВП-4. Можливо, стимулюючий ефект імуномодуляторів мікробного походження обумовлений наявністю різних PAMPs в їх складі і пов`язаний зі здатністю впливати через рецепторний апарат МЛ.