Мікробіологічний метод лабораторної діагностики інфекційних хвороб

Після отримання результатів обстеження і з урахуванням епідеміологічних даних встановлюють заключний діагноз. У діагнозі вказують нозологічну форму, шифр за МКХ-10, метод підтвердження діагнозу, тяжкість і особливості перебігу хвороби, період хвороби, наявність ускладнень і супутніх захворювань, наприклад: «Черевний тиф (гемокультура), важкий перебіг хвороби, період разгара- ускладнення - кишкова кровотеченіе- супутнє захворювання - цукровий діабет ». Максимально точно сформульований і докладний діагноз визначає терапевтичну тактику.

У ряді випадків, коли клінічних даних недостатньо, а лабораторні дослідження не дозволяють встановити етіологію хвороби, допускається постановка синдромного діагнозу (наприклад, харчова токсикоінфекція, гостре респіраторне захворювання, ГРВІ).

Лабораторні дослідження грають важливу роль у встановленні діагнозу інфекційних хвороб, призначення етіотропної терапії, проведенні контролю за ефективністю лікування. процес специфічної лабораторної діагностики заснований на виявленні збудника і відповідної реакції організму людини в ході інфекційного процесу. Він складається з трьох етапів: збору матеріалу, транспортування і його дослідження в лабораторії. До проведення кожного етапу висувають певні вимоги, від дотримання яких залежить ефективність лабораторної діагностики. завдання лікаря полягає в правильному виборі методу дослідження і грамотної оцінки його результатів.

Лабораторні методи діагностики різні за чутливості і специфічності. Чутливість методу відображає ймовірність того, що результат тесту буде позитивним у інфікованого пацієнта і визначається відношенням загального числа позитивних результатів до загальної кількості інфікованих пацієнтів. Чим вище чутливість тесту, тим менше ймовірність отримання хибно-негативних результатів. Критерій специфічності відображає ймовірність того, що результат тесту буде позитивним у неінфікованої пацієнта, і його обчислюють як відношення загального числа негативних результатів до загального числа неінфікованих пацієнтів. Чим менше специфічність, тим більша ймовірність отримання хибнопозитивних результатів. Обидва показники виражають у відсотках.

Мікробіологічний метод діагностики заснований на виявленні збудників у біологічному матеріалі. Використовують світлооптичних і електронну мікроскопію.

Мікробіологічний метод широко застосовують в діагностиці інфекційних хвороб бактеріальної, протозойні етіології і, рідше, вірусних хвороб.

У практиці роботи бактеріологічної лабораторії мікроскопічне дослідження в більшості випадків має значення прискореної орієнтовною діагностики. Основними завданнями мікроскопії служать виявлення збудника в клінічному матеріалі, орієнтовна ідентифікація на підставі визначення характерних морфологічних ітинкторіальних ознак бактерій, а також вивчення забарвлених мазків з колоній чистих культур.

Матеріалом для мікроскопічного дослідження можуть бути кров, кістковий мозок, ліквор, пунктати лімфатичних вузлів, фекалії, дуоденальний вміст і жовч, сеча, харкотиння, виділення сечостатевих шляхів, біоптати тканин, мазки зі слизової оболонки ротової порожнини, піднебінних мигдалин, носа та ін.

Для виявлення «кровепаразітов», наприклад найпростіших (малярійні плазмодії, трипаносоми, лейшманії, бабезии) і гельмінтів (мікрофілярії), досліджують препарати «тонкий мазок» і / або «товста крапля» крові.

Препарат «товста крапля» готують двома способами:

Підсихати «товсті краплі» повинні поступово на повітрі, без підігріву, в умовах захисту їх від пошкодження комахами. Препарати крові фарбують без попередньої фіксації за Романовським-Гімзою.

Для приготовлення тонкого мазка роблять відбиток крові поблизу краю предметного скла, потім ребром під кутом 45 ° підводять до краплі шліфоване скло і після розтікання крові уздовж його краю безперервним рухом розподіляють кров по поверхні предметного скла. Отриманий препарат фіксують і забарвлюють.

Спинномозкову рідину для мікробіологічного дослідження відбирають в стерильну пробірку під час люмбальної пункції. Для приготування препарату використовують осад, що утворюється спонтанно або в результаті центрифугування.

Мазки зі слизової оболонки ротової порожнини беруть натще або через 2 години після їжі стерильним ватним тампоном, мазок-відбиток готують на предметному склі. При наявності плівки останню знімають стерильним пінцетом. Матеріал з носової порожнини забирають стерильним ватним тампоном, який вводять вглиб порожнини носа. Мазок з носоглотки беруть стерильним заднеглоточним тампоном, вводячи його обережно через носовий отвір в носоглотку. Для проведення аналізів на дифтерію досліджують одночасно плівки і слиз з носа і глотки. Матеріал з носа і глотки беруть різними тампонами.

Сечу для мікроскопічного дослідження збирають в стерильний посуд після ретельного туалету зовнішніх статевих органів. Для приготування препарату використовують осад сечі.

мікроскопічного дослідження піддають нативні (нефіксовані, нефарбовані) і пофарбовані препарати. У першому випадку виявляють живі мікроорганізми в препараті «висяча крапля» або «роздавлена крапля», оцінюючи рухливість та морфологічні властивості збудника. Наприклад, темнопольного мікроскопію нативних препаратів використовують для діагностики спірохетозів (первинного сифілісу, лептоспірозу, епідемічного (вшіного) поворотного тифу), кандидозу або інших грибкових захворювань. У цих випадках результат мікроскопічного дослідження дає підставу для постановки діагнозу.

Найбільш широко застосовують мікроскопію мікроорганізмів в пофарбованому стані, зокрема для діагностики паразитарних хвороб (малярія, амебіаз, лямбліоз, лейшманіоз, гельмінтози). Для забарвлення препаратів використовують орієнтовні, спеціальні і диференційні методи. Орієнтовна забарвлення дозволяє оцінити загальну морфологію мікроорганізму. З цією метою застосовують стандартні барвники - фуксин або метиленовий синій.

Серед спеціальних методів найбільш часто використовують забарвлення по Граму. Цей метод виявляє здатність бактерій утримувати барвник кристалічний фіолетовий (або генціановий фіолетовий) або знебарвлюватися в спирті. Грампозитивні бактерії забарвлюються в фіолетовий колір, а грамнегативні - в червоний, так як вони знебарвлюються в спирті і їх додатково забарвлюють фуксином. Забарвлення збудників по Граму дозволяє визначити первинний вибір засобів антибактеріальної терапії.

До спеціальних методів відносять забарвлення за Цілем-Нільсеном, що виявляє кислотно-і спиртостійкі палички, зокрема мікобактерії туберкульозу, які фарбуються в червоний колір, а інші мікроорганізми - в синій.

диференціюючими називають методи забарвлення окремих елементів бактеріальної клітини. Наприклад, забарвлення метахроматінових (волютиновими) включень в бактеріях (по Нейссеру, Майеру), забарвлення капсул (по Гіссен, Лейфсону, Антоні), суперечка, джгутиків (по Леффлеру, Бейлі, Грею і ін.), Клітинної стінки, хроматінових (ядерних) елементів (за Романовським-Гімзою і Пекарському).

До мікроскопічним методів дослідження відносять імунофлюоресценція (Люмінесцентна мікроскопія), використовувану для діагностики бактеріальних і вірусних інфекцій і засновану на застосуванні антитіл, мічених флюоресцирующим барвником.

Ефективність мікроскопічного методу визначається його чутливістю і специфічністю. Специфічність обмежується можливої помилковою ідентифікацією збудника через артефактів. Крім того, при проведенні мікроскопічного дослідження мають значення техніка дослідження- наприклад, при діагностиці малярії чутливість дослідження крові методом «товстої краплі» в 20-40 разів вище, ніж при дослідженні методом тонкого мазка, оскільки даний препарат дозволяє переглядати більший обсяг крові, а крім того, плазмодії в препараті розташовуються внеклеточно, що полегшує їх виявлення і кількісну оцінку.

Проте чутливість методу «товстої краплі», що проводиться за стандартами ВООЗ (дослідження мінімум 100 полів зору протягом мінімум 5 хв), все ж не перевищує 95% через нерівномірність розподілу малярійних плазмодіїв крові, особливо при низькому рівні паразитемии.

Важливим способом підвищення чутливості мікробіологічного методу є використання різних способів концентрації патогенів, наприклад осадження або флотация проби при дослідженні калу і фільтрація через мілліпоровие фільтри проб крові, сечі, спинномозкової рідини.

Підвищенню ефективності мікроскопічного дослідження сприяє кількісне визначення виявленого паразита в поле зору або одиниці об`єму досліджуваного матеріалу. Зокрема, при малярії (особливо при виявленні Р.Гакпрагіт) важливо визначення інтенсивності паразитемии.

Кількісна оцінка мікрофлори в мазку, а також виявлення мікробних асоціацій важливі в разі необхідності визначення етіологічної ролі умовно-патогенних мікроорганізмів. Відомо, що максимальна обумовлена концентрація бактерій в мазку з нативного матеріалу становить 10  клітин в 1 мл. Для більшості видів досліджуваного матеріалу етіологічно значущим вважається виявлення умовно-патогенних бактерій певного виду в концентрації не менше 10 -10  клітин в 1 мл, тому чутливість мікроскопічного методу в більшості випадків задовольняє потребам клінічної мікробіології.

Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я.

Поділитися в соц мережах: